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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 质粒和目的片段
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潇潇杨雨125

银虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by 潇潇杨雨125 at 2014-05-06 10:59:11
关键是我的是兼并引物，没有酶切位点啊！
...

谢谢，阳性克隆不是就可以确定有没有连接吗？

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11楼2014-05-06 17:15:36
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潇潇杨雨125

银虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by HYZ221314 at 2014-05-06 09:54:07
嗯，说的很在理！...

谢谢！不是阳性克隆就验证是否连在载体上吗？

[ 发自小木虫客户端 ]
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12楼2014-05-06 17:17:33
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PCR-CL

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
连接前是线性的片段。
连接后是环形的质粒，是超螺旋结构，所以不能直接与线性的片段比较长短。
目的片段检测方法;
1\提取质粒后选择载体上酶切位点酶切后检测片段
2\用扩增片段的引物或载体上引物扩增，可以检测插入片段长短。
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13楼2014-05-06 21:27:17
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朱多龙

木虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 潇潇杨雨125 at 2014-05-06 17:10:59
用T载体上的酶来切吗？
...

对啊，你验证就用T载体上的酶切一下就好了啊！
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14楼2014-05-06 21:43:02
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r-rainbow

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你是直接跑得质粒吗？质粒的电泳当然和那些线性的DNA电泳迁移率不一样
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15楼2014-05-07 10:49:38
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狮子山下君

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以选择T载体上的酶切位点，酶切鉴定，如果跑胶鉴定后，切开的是T载的大小和你目的片段的大小就说明你连上去了呀
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16楼2014-05-08 10:53:41
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