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潇潇杨雨125

银虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by 潇潇杨雨125 at 2014-05-06 10:59:11
关键是我的是兼并引物,没有酶切位点啊!
...

谢谢,阳性克隆不是就可以确定有没有连接吗?

[ 发自小木虫客户端 ]
11楼2014-05-06 17:15:36
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潇潇杨雨125

银虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by HYZ221314 at 2014-05-06 09:54:07
嗯,说的很在理!...

谢谢!不是阳性克隆就验证是否连在载体上吗?

[ 发自小木虫客户端 ]
12楼2014-05-06 17:17:33
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PCR-CL

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
连接前是线性的片段。
连接后是环形的质粒,是超螺旋结构,所以不能直接与线性的片段比较长短。
目的片段检测方法;
1\提取质粒后选择载体上酶切位点酶切后检测片段
2\用扩增片段的引物或载体上引物扩增,可以检测插入片段长短。
13楼2014-05-06 21:27:17
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朱多龙

木虫 (小有名气)

引用回帖:
10楼: Originally posted by 潇潇杨雨125 at 2014-05-06 17:10:59
用T载体上的酶来切吗?
...

对啊,你验证就用T载体上的酶切一下就好了啊!
14楼2014-05-06 21:43:02
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r-rainbow

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你是直接跑得质粒吗?质粒的电泳当然和那些线性的DNA电泳迁移率不一样
15楼2014-05-07 10:49:38
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狮子山下君

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可以选择T载体上的酶切位点,酶切鉴定,如果跑胶鉴定后,切开的是T载的大小和你目的片段的大小就说明你连上去了呀
16楼2014-05-08 10:53:41
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