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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 质粒和目的片段
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潇潇杨雨125

银虫 (小有名气)

[求助] 质粒和目的片段 已有6人参与

将T载体与目的片段连接后，做阳性克隆有目的片段，但是将连接体用质粒提取试剂盒提取后，再跑电泳时，为什么最亮的条带介于T载体和目的片段之间？？不应该是载体和目的片段之和吗？

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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1楼 2014-05-06 08:20:42
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PCR-CL

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
连接前是线性的片段。
连接后是环形的质粒，是超螺旋结构，所以不能直接与线性的片段比较长短。
目的片段检测方法;
1\提取质粒后选择载体上酶切位点酶切后检测片段
2\用扩增片段的引物或载体上引物扩增，可以检测插入片段长短。
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13楼2014-05-06 21:27:17
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飞飞fly

银虫 (正式写手)
飘过

[ 发自小木虫客户端 ]
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2楼2014-05-06 08:21:02
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HYZ221314

至尊木虫 (职业作家)

优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
DNA跑电泳和体积、长度有关系，可能是你所说的条带卷缩了导致比T载体短比目的长也或者提质粒过程中打断了，但这不可能？

[ 发自小木虫客户端 ]
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青山不断，绿水长流
3楼2014-05-06 08:27:35
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朱多龙

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
3楼: Originally posted by HYZ221314 at 2014-05-06 08:27:35
DNA跑电泳和体积、长度有关系，可能是你所说的条带卷缩了导致比T载体短比目的长也或者提质粒过程中打断了，但这不可能？

直接酶切后电泳就好了吗，干嘛那么纠结。也不知道你的目的片段是多大啊。你说的情况很正常，有时候提出的载体上会被蛋白吸附又或者质粒的构型发生改变导致直接跑胶看不出来啊。有时间就没切好了。
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4楼2014-05-06 09:50:43
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