24小时热门版块排行榜    

查看: 3107  |  回复: 12
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

挣扎的小虫

新虫 (小有名气)

[交流] 酵母表达目的蛋白,表达量一直不高

做酵母表达,两年了!其中表达一个半胱氨酸组织蛋白酶,用载体pPICZaA,表达菌GS115和SMD1168,表达量很低。跑胶后,目的蛋白有三条带,其中有两条是糖基化的。进行了密码子优化,更换了载体,宿主菌但表达量没有明显提高,表达量一直停留在8mg/L。在这样的情况下,还有什么办法可以提高表达量,想和各位大神探讨一下。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ggyy0911

铁虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
6楼: Originally posted by jjwhl at 2015-01-06 16:15:29
ggyy0911,你好!我现在是做毕赤酵母GS115表达原核酶蛋白,表达量比较低。“除非你确实不确定你的蛋白是哪种类型……”这句话什么意思?是说用的宿主菌与目的蛋白原始菌株是分泌还是胞内表达有关系吗?还是什么情况 ...

啊,我上次说错了,X33是胞外分泌的。如果你的蛋白合成后会分泌出胞外,那你的蛋白就会在表达液的上清里,但如果不是分泌型的,就在酵母细胞里,你在上清里是拿不到目的蛋白的。得破碎细胞才行。而且就算用了分泌型酵母和载体,也不一定能正确的把蛋白分泌出来,最好还是上清和胞体破碎同时检测。此外酵母系统会对蛋白进行折叠和糖基化修饰,你既然是原核的蛋白酶,可能表达出来后被过度修饰了。我也是刚开始做,个人想法,咱俩可以交流交流……

[ 发自小木虫客户端 ]
7楼2015-01-07 07:47:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

huantianxi

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
用一下x-33试试,我们用的就是这个菌种,表达量能达到3-4g/l
2楼2014-04-21 18:22:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

挣扎的小虫

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by huantianxi at 2014-04-21 18:22:33
用一下x-33试试,我们用的就是这个菌种,表达量能达到3-4g/l

谢谢!请问你那边有这个菌种吗?能否帮忙寄过一管来!
3楼2014-07-24 17:14:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ggyy0911

铁虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by 挣扎的小虫 at 2014-07-24 17:14:11
谢谢!请问你那边有这个菌种吗?能否帮忙寄过一管来!...

x-33是胞内分泌啊,你既然之前用gs和smd,应该是不能用x33的,除非你确实不确定你的蛋白是哪种类型……

[ 发自小木虫客户端 ]
4楼2014-10-19 00:25:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +8 Tide man 2026-08-11 8/400 2026-08-12 17:30 by Vivilian
[基金申请] 不应该看fileCode +5 且听虎啸 2026-08-12 6/300 2026-08-12 16:26 by Tide man
[基金申请] 好奇怪的filecode +5 布布和一二 2026-08-08 6/300 2026-08-12 16:11 by 云上清扬
[基金申请] FileCode能看出啥? +8 要乐观耀哥 2026-08-10 21/1050 2026-08-12 16:08 by 云上清扬
[基金申请] 长年满屏的广告,版主太不责任了。基金也等的急 +4 gltch 2026-08-12 4/200 2026-08-12 16:08 by eulota
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +22 Lanmanbaby 2026-08-09 35/1750 2026-08-12 14:38 by sdfapple719
[论文投稿] 职称评审,求友友推荐见刊最快的期刊 +4 工厂打螺丝 2026-08-08 4/200 2026-08-12 09:18 by hansi2025
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +3 yuleib84 2026-08-11 3/150 2026-08-11 21:53 by jnhyjjm
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +8 Tide man 2026-08-10 9/450 2026-08-11 20:39 by beefly
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +3 majunge000 2026-08-11 4/200 2026-08-11 20:13 by lch2012
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +3 布布和一二 2026-08-11 4/200 2026-08-11 15:20 by aasahr
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 关于代码变化问题,想知道的进来 +17 且听虎啸 2026-08-07 24/1200 2026-08-10 18:35 by zhangduo2008
[基金申请] 静等基金结果 +5 gjjjzhong 2026-08-10 16/800 2026-08-10 17:19 by Tide man
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] fileCode有新解读? +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 固定端突然变了,今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
信息提示
请填处理意见