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挣扎的小虫

新虫 (小有名气)

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[交流] 酵母表达目的蛋白，表达量一直不高

做酵母表达，两年了！其中表达一个半胱氨酸组织蛋白酶，用载体pPICZaA，表达菌GS115和SMD1168，表达量很低。跑胶后，目的蛋白有三条带，其中有两条是糖基化的。进行了密码子优化，更换了载体，宿主菌但表达量没有明显提高，表达量一直停留在8mg/L。在这样的情况下，还有什么办法可以提高表达量，想和各位大神探讨一下。

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1楼 2014-04-16 08:43:59

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ggyy0911

铁虫 (正式写手)

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引用回帖:

6楼: Originally posted by jjwhl at 2015-01-06 16:15:29
ggyy0911，你好！我现在是做毕赤酵母GS115表达原核酶蛋白，表达量比较低。“除非你确实不确定你的蛋白是哪种类型……”这句话什么意思？是说用的宿主菌与目的蛋白原始菌株是分泌还是胞内表达有关系吗？还是什么情况 ...

啊，我上次说错了，X33是胞外分泌的。如果你的蛋白合成后会分泌出胞外，那你的蛋白就会在表达液的上清里，但如果不是分泌型的，就在酵母细胞里，你在上清里是拿不到目的蛋白的。得破碎细胞才行。而且就算用了分泌型酵母和载体，也不一定能正确的把蛋白分泌出来，最好还是上清和胞体破碎同时检测。此外酵母系统会对蛋白进行折叠和糖基化修饰，你既然是原核的蛋白酶，可能表达出来后被过度修饰了。我也是刚开始做，个人想法，咱俩可以交流交流……

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