应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 酵母表达目的蛋白，表达量一直不高
131/2返回列表12下一页
查看: 3151  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

挣扎的小虫

新虫 (小有名气)

[交流] 酵母表达目的蛋白，表达量一直不高

做酵母表达，两年了！其中表达一个半胱氨酸组织蛋白酶，用载体pPICZaA，表达菌GS115和SMD1168，表达量很低。跑胶后，目的蛋白有三条带，其中有两条是糖基化的。进行了密码子优化，更换了载体，宿主菌但表达量没有明显提高，表达量一直停留在8mg/L。在这样的情况下，还有什么办法可以提高表达量，想和各位大神探讨一下。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-04-16 08:43:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huantianxi

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
用一下x-33试试，我们用的就是这个菌种，表达量能达到3-4g/l
赞一下 回复此楼
2楼2014-04-21 18:22:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

挣扎的小虫

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by huantianxi at 2014-04-21 18:22:33
用一下x-33试试，我们用的就是这个菌种，表达量能达到3-4g/l

谢谢！请问你那边有这个菌种吗？能否帮忙寄过一管来！
赞一下 回复此楼
3楼2014-07-24 17:14:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ggyy0911

铁虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by 挣扎的小虫 at 2014-07-24 17:14:11
谢谢！请问你那边有这个菌种吗？能否帮忙寄过一管来！...

x-33是胞内分泌啊，你既然之前用gs和smd，应该是不能用x33的，除非你确实不确定你的蛋白是哪种类型……

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
4楼2014-10-19 00:25:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jjwhl

银虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
楼主，有没有找到更好的方法呢？
赞一下 回复此楼
5楼2015-01-06 15:38:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jjwhl

银虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by ggyy0911 at 2014-10-19 00:25:32
x-33是胞内分泌啊，你既然之前用gs和smd，应该是不能用x33的，除非你确实不确定你的蛋白是哪种类型……
...

ggyy0911，你好！我现在是做毕赤酵母GS115表达原核酶蛋白，表达量比较低。“除非你确实不确定你的蛋白是哪种类型……”这句话什么意思？是说用的宿主菌与目的蛋白原始菌株是分泌还是胞内表达有关系吗？还是什么情况。
赞一下 回复此楼
6楼2015-01-06 16:15:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ggyy0911

铁虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
6楼: Originally posted by jjwhl at 2015-01-06 16:15:29
ggyy0911，你好！我现在是做毕赤酵母GS115表达原核酶蛋白，表达量比较低。“除非你确实不确定你的蛋白是哪种类型……”这句话什么意思？是说用的宿主菌与目的蛋白原始菌株是分泌还是胞内表达有关系吗？还是什么情况 ...

啊，我上次说错了，X33是胞外分泌的。如果你的蛋白合成后会分泌出胞外，那你的蛋白就会在表达液的上清里，但如果不是分泌型的，就在酵母细胞里，你在上清里是拿不到目的蛋白的。得破碎细胞才行。而且就算用了分泌型酵母和载体，也不一定能正确的把蛋白分泌出来，最好还是上清和胞体破碎同时检测。此外酵母系统会对蛋白进行折叠和糖基化修饰，你既然是原核的蛋白酶，可能表达出来后被过度修饰了。我也是刚开始做，个人想法，咱俩可以交流交流……

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
7楼2015-01-07 07:47:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ggyy0911

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by jjwhl at 2015-01-06 16:15:29
ggyy0911，你好！我现在是做毕赤酵母GS115表达原核酶蛋白，表达量比较低。“除非你确实不确定你的蛋白是哪种类型……”这句话什么意思？是说用的宿主菌与目的蛋白原始菌株是分泌还是胞内表达有关系吗？还是什么情况 ...

X33我现在在用，如果你愿意的话，我这里没有SMD1168，咱俩可以换。

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
8楼2015-01-07 07:49:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jjwhl

银虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by huantianxi at 2014-04-21 18:22:33
用一下x-33试试，我们用的就是这个菌种，表达量能达到3-4g/l

楼主，你的这个3g/l，是摇瓶水平还是发酵罐水平呢？是表达的酶蛋白，还是其他的药物蛋白呢？目测，酶蛋白的话，表达量有点低
赞一下 回复此楼
9楼2015-04-20 17:02:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhxian

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
楼主，可以要点你的ppiczaA载体不，可以用其他交换

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
10楼2018-12-28 00:41:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 挣扎的小虫 的主题更新
131/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 11/550 2026-08-29 20:18 by 63GmZBFV29mG
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +5 德尚中行 2026-08-27 6/300 2026-08-29 18:10 by manplx
[博后之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 4/200 2026-08-29 18:04 by 4FFAWE8HcgUD
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +5 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 9/450 2026-08-29 14:03 by jCd0dEvKHShX
[找工作] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 6/300 2026-08-29 11:51 by jCd0dEvKHShX
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 6/300 2026-08-29 11:40 by jCd0dEvKHShX
[基金申请] 国自然评审意见 +13 wangmingqi 2026-08-28 19/950 2026-08-29 10:22 by Poppy1104
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
[基金申请] 系统查不到 +11 董八千 2026-08-26 11/550 2026-08-28 18:06 by Leogzhya
[基金申请] 怎么查啊 +6 huang1991js 2026-08-26 6/300 2026-08-28 08:42 by winsaint
[基金申请] 看板上这么多中的，有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +5 叶九微 2026-08-26 5/250 2026-08-27 10:35 by l_zh2008
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜？ 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +23 koalala 2026-08-24 26/1300 2026-08-26 14:29 by 宝贝虫子
[基金申请] 国际合作可查了，中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 国合现在查不到了吗？ +10 chengyan1220 2026-08-24 20/1000 2026-08-26 08:57 by peasantsprig
[基金申请] 明天应该可查了！？ +6 chengyan1220 2026-08-23 6/300 2026-08-25 19:45 by zfd97
[基金申请] 某些机构，以效率低为荣，以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑，不妨来听听这首《基金之外》 +8 scalable 2026-08-24 8/400 2026-08-25 12:52 by jnhyjjm
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭