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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 酵母表达目的蛋白，表达量一直不高
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挣扎的小虫

新虫 (小有名气)

[交流] 酵母表达目的蛋白，表达量一直不高

做酵母表达，两年了！其中表达一个半胱氨酸组织蛋白酶，用载体pPICZaA，表达菌GS115和SMD1168，表达量很低。跑胶后，目的蛋白有三条带，其中有两条是糖基化的。进行了密码子优化，更换了载体，宿主菌但表达量没有明显提高，表达量一直停留在8mg/L。在这样的情况下，还有什么办法可以提高表达量，想和各位大神探讨一下。
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1楼 2014-04-16 08:43:59
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huantianxi

新虫 (初入文坛)
★
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用一下x-33试试，我们用的就是这个菌种，表达量能达到3-4g/l
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2楼2014-04-21 18:22:33
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挣扎的小虫

新虫 (小有名气)
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2楼: Originally posted by huantianxi at 2014-04-21 18:22:33
用一下x-33试试，我们用的就是这个菌种，表达量能达到3-4g/l

谢谢！请问你那边有这个菌种吗？能否帮忙寄过一管来！
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3楼2014-07-24 17:14:11
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ggyy0911

铁虫 (正式写手)
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3楼: Originally posted by 挣扎的小虫 at 2014-07-24 17:14:11
谢谢！请问你那边有这个菌种吗？能否帮忙寄过一管来！...

x-33是胞内分泌啊，你既然之前用gs和smd，应该是不能用x33的，除非你确实不确定你的蛋白是哪种类型……

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4楼2014-10-19 00:25:32
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jjwhl

银虫 (正式写手)
★
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楼主，有没有找到更好的方法呢？
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5楼2015-01-06 15:38:34
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jjwhl

银虫 (正式写手)
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4楼: Originally posted by ggyy0911 at 2014-10-19 00:25:32
x-33是胞内分泌啊，你既然之前用gs和smd，应该是不能用x33的，除非你确实不确定你的蛋白是哪种类型……
...

ggyy0911，你好！我现在是做毕赤酵母GS115表达原核酶蛋白，表达量比较低。“除非你确实不确定你的蛋白是哪种类型……”这句话什么意思？是说用的宿主菌与目的蛋白原始菌株是分泌还是胞内表达有关系吗？还是什么情况。
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6楼2015-01-06 16:15:29
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ggyy0911

铁虫 (正式写手)
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6楼: Originally posted by jjwhl at 2015-01-06 16:15:29
ggyy0911，你好！我现在是做毕赤酵母GS115表达原核酶蛋白，表达量比较低。“除非你确实不确定你的蛋白是哪种类型……”这句话什么意思？是说用的宿主菌与目的蛋白原始菌株是分泌还是胞内表达有关系吗？还是什么情况 ...

啊，我上次说错了，X33是胞外分泌的。如果你的蛋白合成后会分泌出胞外，那你的蛋白就会在表达液的上清里，但如果不是分泌型的，就在酵母细胞里，你在上清里是拿不到目的蛋白的。得破碎细胞才行。而且就算用了分泌型酵母和载体，也不一定能正确的把蛋白分泌出来，最好还是上清和胞体破碎同时检测。此外酵母系统会对蛋白进行折叠和糖基化修饰，你既然是原核的蛋白酶，可能表达出来后被过度修饰了。我也是刚开始做，个人想法，咱俩可以交流交流……

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7楼2015-01-07 07:47:37
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ggyy0911

铁虫 (正式写手)
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6楼: Originally posted by jjwhl at 2015-01-06 16:15:29
ggyy0911，你好！我现在是做毕赤酵母GS115表达原核酶蛋白，表达量比较低。“除非你确实不确定你的蛋白是哪种类型……”这句话什么意思？是说用的宿主菌与目的蛋白原始菌株是分泌还是胞内表达有关系吗？还是什么情况 ...

X33我现在在用，如果你愿意的话，我这里没有SMD1168，咱俩可以换。

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8楼2015-01-07 07:49:18
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jjwhl

银虫 (正式写手)
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2楼: Originally posted by huantianxi at 2014-04-21 18:22:33
用一下x-33试试，我们用的就是这个菌种，表达量能达到3-4g/l

楼主，你的这个3g/l，是摇瓶水平还是发酵罐水平呢？是表达的酶蛋白，还是其他的药物蛋白呢？目测，酶蛋白的话，表达量有点低
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9楼2015-04-20 17:02:08
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zhxian

新虫 (小有名气)
★
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楼主，可以要点你的ppiczaA载体不，可以用其他交换

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10楼2018-12-28 00:41:57
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