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挣扎的小虫

新虫 (小有名气)

[交流] 酵母表达目的蛋白,表达量一直不高

做酵母表达,两年了!其中表达一个半胱氨酸组织蛋白酶,用载体pPICZaA,表达菌GS115和SMD1168,表达量很低。跑胶后,目的蛋白有三条带,其中有两条是糖基化的。进行了密码子优化,更换了载体,宿主菌但表达量没有明显提高,表达量一直停留在8mg/L。在这样的情况下,还有什么办法可以提高表达量,想和各位大神探讨一下。
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huantianxi

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
用一下x-33试试,我们用的就是这个菌种,表达量能达到3-4g/l
2楼2014-04-21 18:22:33
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挣扎的小虫

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by huantianxi at 2014-04-21 18:22:33
用一下x-33试试,我们用的就是这个菌种,表达量能达到3-4g/l

谢谢!请问你那边有这个菌种吗?能否帮忙寄过一管来!
3楼2014-07-24 17:14:11
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ggyy0911

铁虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by 挣扎的小虫 at 2014-07-24 17:14:11
谢谢!请问你那边有这个菌种吗?能否帮忙寄过一管来!...

x-33是胞内分泌啊,你既然之前用gs和smd,应该是不能用x33的,除非你确实不确定你的蛋白是哪种类型……

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4楼2014-10-19 00:25:32
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jjwhl

银虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
楼主,有没有找到更好的方法呢?
5楼2015-01-06 15:38:34
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jjwhl

银虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by ggyy0911 at 2014-10-19 00:25:32
x-33是胞内分泌啊,你既然之前用gs和smd,应该是不能用x33的,除非你确实不确定你的蛋白是哪种类型……
...

ggyy0911,你好!我现在是做毕赤酵母GS115表达原核酶蛋白,表达量比较低。“除非你确实不确定你的蛋白是哪种类型……”这句话什么意思?是说用的宿主菌与目的蛋白原始菌株是分泌还是胞内表达有关系吗?还是什么情况。
6楼2015-01-06 16:15:29
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ggyy0911

铁虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
6楼: Originally posted by jjwhl at 2015-01-06 16:15:29
ggyy0911,你好!我现在是做毕赤酵母GS115表达原核酶蛋白,表达量比较低。“除非你确实不确定你的蛋白是哪种类型……”这句话什么意思?是说用的宿主菌与目的蛋白原始菌株是分泌还是胞内表达有关系吗?还是什么情况 ...

啊,我上次说错了,X33是胞外分泌的。如果你的蛋白合成后会分泌出胞外,那你的蛋白就会在表达液的上清里,但如果不是分泌型的,就在酵母细胞里,你在上清里是拿不到目的蛋白的。得破碎细胞才行。而且就算用了分泌型酵母和载体,也不一定能正确的把蛋白分泌出来,最好还是上清和胞体破碎同时检测。此外酵母系统会对蛋白进行折叠和糖基化修饰,你既然是原核的蛋白酶,可能表达出来后被过度修饰了。我也是刚开始做,个人想法,咱俩可以交流交流……

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7楼2015-01-07 07:47:37
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ggyy0911

铁虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by jjwhl at 2015-01-06 16:15:29
ggyy0911,你好!我现在是做毕赤酵母GS115表达原核酶蛋白,表达量比较低。“除非你确实不确定你的蛋白是哪种类型……”这句话什么意思?是说用的宿主菌与目的蛋白原始菌株是分泌还是胞内表达有关系吗?还是什么情况 ...

X33我现在在用,如果你愿意的话,我这里没有SMD1168,咱俩可以换。

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8楼2015-01-07 07:49:18
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jjwhl

银虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
2楼: Originally posted by huantianxi at 2014-04-21 18:22:33
用一下x-33试试,我们用的就是这个菌种,表达量能达到3-4g/l

楼主,你的这个3g/l,是摇瓶水平还是发酵罐水平呢?是表达的酶蛋白,还是其他的药物蛋白呢?目测,酶蛋白的话,表达量有点低
9楼2015-04-20 17:02:08
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zhxian

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
楼主,可以要点你的ppiczaA载体不,可以用其他交换

发自小木虫Android客户端
10楼2018-12-28 00:41:57
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