24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
查看: 4166  |  回复: 23
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

sxy900803

木虫 (小有名气)

[求助] 菌液PCR出现问题了 已有14人参与

本人最近做菌液PCR,老是没有目标条带,而是像图中所示那样,是为什么呢?求助大家,帮帮忙,很急!
我的是10ul的体系:Takara的Taq酶 0.25ul,
                               dNTP mixture 1ul,
                               10xPCR Buffer 5ul,
                               引物各1ul,加灭菌蒸馏水至10ul,
                               菌液4ul.
引物用的是PMD-19T载体的通用引物:RV-M和M13-47.
恳请遇到过类似情况的童鞋帮帮忙!谢谢大家了!

菌液PCR出现问题了
}Z47[FAC0SFFJ`VZH4`J`_B.jpg
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

核酸生物学实验经验

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lairongpeng

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by lairongpeng at 2014-04-08 19:55:29
1.体系有问题,10μl的体系都超了,还有,既然是10ul体系为什么buffer要加5ul ? 2.你这是目的片段连T载体转化挑单克隆摇菌后的PCR把?为什么要用t载体的通用引物?不用目的片段的引物?3.做一个阳性和阴性对照吧?4 ...

感觉你不怎么理解pcr的原理,和T载体上的引物位置。

[ 发自小木虫客户端 ]
7楼2014-04-08 19:58:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 24 个回答

ltfe567

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-04-08 17:26:18
最左侧的事DNA Marker 的条带吧?你这好像是出现非特异性条带了,是不是引物没选对呢?或者考虑下降落PCR,我也是新手,咱们互相交流
2楼2014-04-08 17:06:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sxy900803

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by ltfe567 at 2014-04-08 17:06:48
最左侧的事DNA Marker 的条带吧?你这好像是出现非特异性条带了,是不是引物没选对呢?或者考虑下降落PCR,我也是新手,咱们互相交流

最左边的是Maker,之前师姐都是用的这对引物都是可以的,也不知道问题出在哪,都做了好久的实验了,啥结果都还没,急死人了

[ 发自小木虫客户端 ]
3楼2014-04-08 18:29:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
引用回帖:
3楼: Originally posted by sxy900803 at 2014-04-08 18:29:35
最左边的是Maker,之前师姐都是用的这对引物都是可以的,也不知道问题出在哪,都做了好久的实验了,啥结果都还没,急死人了
...

PCR程序有问题没?

[ 发自小木虫客户端 ]
4楼2014-04-08 18:36:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 279学硕食品专业求调剂院校 20+7 孤独的狼爱吃羊 2026-04-12 29/1450 2026-04-16 09:00 by screening
[考研] 085404 22408 309分求调剂 +9 lzmk 2026-04-14 10/500 2026-04-15 20:02 by 学员JpLReM
[考研] 290调剂生物0860 +37 哇哈哈,。 2026-04-11 43/2150 2026-04-15 18:55 by zhuwenxu
[考研] 生物学调剂 +9 纸扇zhishan 2026-04-13 9/450 2026-04-15 18:28 by AN流800
[考研] 材料299专硕求调剂 +17 +21 2026-04-09 17/850 2026-04-15 17:20 by zs92450
[考研] 复试调剂 +21 积极向上; 2026-04-10 23/1150 2026-04-15 12:50 by 西北望—风沙
[考研] 材料工程281还有调剂机会吗 +43 xaw. 2026-04-11 44/2200 2026-04-15 12:46 by 西北望—风沙
[考研] 一志愿中国科学院上海有机所,有机化学356分找调剂 +12 Nadiums 2026-04-09 13/650 2026-04-14 17:54 by lhj2009
[考研] 366求调剂 +11 不知名的小卅 2026-04-11 11/550 2026-04-14 15:50 by zs92450
[考研] 279求调剂 +12 张番茄不炒蛋 2026-04-11 12/600 2026-04-14 15:38 by zs92450
[考研] 求调剂 +20 MAX怅惘 2026-04-09 22/1100 2026-04-14 14:57 by 独醉梦孤城
[考研] 本科西工大 324求调剂 +5 wysyjs25 2026-04-10 5/250 2026-04-13 23:08 by pies112
[考研] 一志愿双非085400电子信息344 求调剂,对材料和化学方向也感兴趣 +12 无情的小羊 2026-04-09 13/650 2026-04-13 14:17 by 张zhihao
[考研] 一志愿华中农微生物,288分,三年实验经历 +11 代fish 2026-04-09 11/550 2026-04-12 10:21 by Hayaay
[考研] 085410 273求调剂 +10 X1999 2026-04-09 10/500 2026-04-12 09:24 by 逆水乘风
[考研] 一志愿厦大0856,306求调剂 +15 Bblinging 2026-04-11 15/750 2026-04-11 22:53 by 314126402
[考研] 农学0904 312求调剂 +6 Say Never 2026-04-10 6/300 2026-04-11 10:33 by wwj2530616
[考研] 一志愿京区985,085401,与本科专业一致,电子信息工程, +4 阳光开朗的男孩 2026-04-10 4/200 2026-04-10 18:27 by shenrf
[考研] 344求调剂 +7 丶风雪夜归人丶 2026-04-09 7/350 2026-04-10 12:05 by pengliang8036
[考研] 青岛科技大学材料学院,环境学院调剂补录4月10日以前都可以 +3 1青科大。 2026-04-09 5/250 2026-04-10 09:58 by 翩翩一书生
信息提示
请填处理意见