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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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sxy900803

木虫 (小有名气)

[求助] 菌液PCR出现问题了 已有14人参与

本人最近做菌液PCR，老是没有目标条带，而是像图中所示那样，是为什么呢？求助大家，帮帮忙，很急！
我的是10ul的体系：Takara的Taq酶 0.25ul,
                               dNTP mixture 1ul,
                               10xPCR Buffer 5ul,
                               引物各1ul,加灭菌蒸馏水至10ul,
                               菌液4ul.
引物用的是PMD-19T载体的通用引物：RV-M和M13-47.
恳请遇到过类似情况的童鞋帮帮忙！谢谢大家了！

菌液PCR出现问题了
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1楼 2014-04-08 17:04:31
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lairongpeng

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by lairongpeng at 2014-04-08 19:55:29
1.体系有问题，10μl的体系都超了，还有，既然是10ul体系为什么buffer要加5ul ? 2.你这是目的片段连T载体转化挑单克隆摇菌后的PCR把？为什么要用t载体的通用引物？不用目的片段的引物？3.做一个阳性和阴性对照吧？4 ...

感觉你不怎么理解pcr的原理，和T载体上的引物位置。

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7楼2014-04-08 19:58:12
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ltfe567

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-04-08 17:26:18
最左侧的事DNA Marker 的条带吧？你这好像是出现非特异性条带了，是不是引物没选对呢？或者考虑下降落PCR，我也是新手，咱们互相交流
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2楼2014-04-08 17:06:48
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sxy900803

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ltfe567 at 2014-04-08 17:06:48
最左侧的事DNA Marker 的条带吧？你这好像是出现非特异性条带了，是不是引物没选对呢？或者考虑下降落PCR，我也是新手，咱们互相交流

最左边的是Maker,之前师姐都是用的这对引物都是可以的，也不知道问题出在哪，都做了好久的实验了，啥结果都还没，急死人了

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3楼2014-04-08 18:29:35
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
3楼: Originally posted by sxy900803 at 2014-04-08 18:29:35
最左边的是Maker,之前师姐都是用的这对引物都是可以的，也不知道问题出在哪，都做了好久的实验了，啥结果都还没，急死人了
...

PCR程序有问题没？

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4楼2014-04-08 18:36:03
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