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sxy900803

木虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 1730.9
散金: 200
帖子: 185
在线: 135.2小时
虫号: 1245767
注册: 2011-03-26
性别: MM
专业: 环境工程

[求助] 菌液PCR出现问题了已有14人参与

本人最近做菌液PCR，老是没有目标条带，而是像图中所示那样，是为什么呢？求助大家，帮帮忙，很急！
我的是10ul的体系：Takara的Taq酶 0.25ul,
                           dNTP mixture 1ul,
                           10xPCR Buffer 5ul,
                           引物各1ul,加灭菌蒸馏水至10ul,
                           菌液4ul.
引物用的是PMD-19T载体的通用引物：RV-M和M13-47.
恳请遇到过类似情况的童鞋帮帮忙！谢谢大家了！

}Z47[FAC0SFFJ`VZH4`J`_B.jpg

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1楼2014-04-08 17:04:31

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lairongpeng

银虫 (正式写手)

应助: 15 (小学生)
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红花: 1
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在线: 159小时
虫号: 2428081
注册: 2013-04-20
性别: GG
专业: 微生物遗传育种学

【答案】应助回帖

引用回帖:

6楼: Originally posted by lairongpeng at 2014-04-08 19:55:29
1.体系有问题，10μl的体系都超了，还有，既然是10ul体系为什么buffer要加5ul ? 2.你这是目的片段连T载体转化挑单克隆摇菌后的PCR把？为什么要用t载体的通用引物？不用目的片段的引物？3.做一个阳性和阴性对照吧？4 ...

感觉你不怎么理解pcr的原理，和T载体上的引物位置。

[ 发自小木虫客户端 ]