应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR条件，请指导。
31/1返回列表
查看: 1740  |  回复: 10
查看全部回帖 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

ming0515

铁杆木虫 (正式写手)

[求助] PCR条件，请指导。 已有4人参与

大家好，
最近进行PCR扩增，产物大小理论值为1580bp，用到的PCR条件为下列两种：
①94℃   5min；94℃   30s，55℃   30s，72℃   1.5min；72℃ 10min；
②94℃   5min；94℃   30s，55℃   1.5min，72℃   30s；72℃ 10min；

让人纠结的是用①正常的PCR条件尝试各种方法就是P不出条带（也做过梯度PCR45-57℃），
但是因为一个意外PCR条件采用了②条件，扩增出了正确的产物。
对此想请教为什么错误的条件②可以P出正确产物，且以后的验证实验是不是也需要采取②条件。
谢谢！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
百代繁华一朝都，谁非过客；千秋明月吹角寒，花是主人；江山图一快，人，不见血，刀，不收锋。
1楼 2014-04-06 09:50:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 2 2014-04-06 23:47:58
ming0515: 金币+2, ★★★★★最佳答案 2014-04-07 16:56:13
55°C的时候，Taq酶还是有活性的，就是说55度的时候，除了引物配对之外，还有延伸的作用，只是速度比较慢而已，72度只有延伸，引物和模板是无法配对的。
赞一下 回复此楼
行至水穷处，坐看云起时
6楼2014-04-06 16:46:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
ming0515: 金币+1, ★★★★★最佳答案 2014-04-07 16:56:26
如果你把55度的时间延长足够，这样72度这一步就可以省略了。
赞一下 回复此楼
行至水穷处，坐看云起时
8楼2014-04-06 22:02:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 ming0515 的主题更新
31/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭