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莊___

木虫 (初入文坛)

[求助] PCR条件一样为什么结果有差已有3人参与

这两个文件2014-2-19-18S下.tif是下午做的,做了一个PCR的退火温度筛选,2000bp的marker旁边是57℃的,然后选择了这个温度,晚上同样的条件又PCR一次,结果出现了2014-2-1918s-下;上.tif这个状况,没有跑出条带了,请问这是为什么呢?条件都没有变化,引物和模板也是一样的。
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-02-20 00:05:50
莊___: 金币+10, 有帮助 2014-02-20 10:20:09
我们做标记PCR也会出现这种情况,同样条件无法重复。有时机器会出问题,建议你再做一次,若还是不行建议重新摸一下条件。
hehe
2楼2014-02-19 22:09:56
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forrestgump

新虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

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gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流! 2014-02-20 00:05:57
莊___: 金币+5, 有帮助 2014-02-20 10:20:24
这个就是PCR的不稳定性,再说你也很难早就2个完全一样的环境啊,孔不一样都不行。
3楼2014-02-19 22:32:48
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俗妮儿~

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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感谢参与,应助指数 +1
莊___: 金币+5, 有帮助, 都是混在一起加的,连模板都混一起了,就是酶是分开加的 2014-02-21 16:43:05
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-03-30 00:28:56
你是不是没加模板或者buffer……
建议你再做一次,这一次体系全都加在一起,然后分装,再加模板和酶,这样可以避免一部分系统误差
4楼2014-02-20 11:40:53
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