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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » qPCR的怪异结果
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yangjingjing

木虫 (正式写手)

[求助] qPCR的怪异结果

各位大神好啊，我昨天做了qpcr，图呢意外没有保存下来~~~那我简要描述下我的结果吧，一共六个样，GAPDH~扩增的Rn-循环数图：前面有一小点可忽略的波折，后面很长的直线，然后一致的对数上升，平台有一点差异，Ct值五个在14.7，一个在15.1；溶解曲线：先是超级高的峰，其下有几个小峰，然后直线，在80的位置有个50以下的峰，其下也有两个小峰。拿这个结果跑琼脂糖胶，单一条带~~~~~~测下cDNA浓度都在120以上，qpcr模板都是两微升，帮忙分析下原因吧，谢谢哈
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努力打败一切
1楼 2013-07-18 21:56:17
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唐朝豪放男

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 对头，引物不能反复冻融 2013-07-19 12:04:20
引物反复冻融多次，已经变质了，你80的峰是引物二聚体
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yangjingjing
2楼2013-07-19 09:00:59
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yb19841014

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助！ 2013-07-21 23:10:47
肯定是有非特异的扩增，只不过跑电泳看不到而已
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yangjingjing
3楼2013-07-21 21:03:54
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yangjingjing

木虫 (正式写手)
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引用回帖:
2楼: Originally posted by 唐朝豪放男 at 2013-07-19 09:00:59
引物反复冻融多次，已经变质了，你80的峰是引物二聚体

可是普通PCR为什么看不出来呢，而且上次用了别的实验室的体系，做出来没有那种奇怪的峰
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努力打败一切
4楼2013-07-23 00:07:48
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yangjingjing

木虫 (正式写手)
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引用回帖:
3楼: Originally posted by yb19841014 at 2013-07-21 21:03:54
肯定是有非特异的扩增，只不过跑电泳看不到而已

是吗？可是~上次换了体系没问题了，那个非特异的不见了，只有80的了。可是这次又是这样了，郁闷啊~~~~还有，为啥我的另外的引物，溶解曲线出现倒峰，而且吧非特异峰多，不同样品溶解曲线峰值还不在同一点上，为嘛啊？引物不行吗？
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努力打败一切
5楼2013-07-23 00:11:06
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