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yangjingjing

木虫 (正式写手)

[求助] qPCR的怪异结果

各位大神好啊,我昨天做了qpcr,图呢意外没有保存下来~~~那我简要描述下我的结果吧,一共六个样,GAPDH~扩增的Rn-循环数图:前面有一小点可忽略的波折,后面很长的直线,然后一致的对数上升,平台有一点差异,Ct值五个在14.7,一个在15.1;溶解曲线:先是超级高的峰,其下有几个小峰,然后直线,在80的位置有个50以下的峰,其下也有两个小峰。拿这个结果跑琼脂糖胶,单一条带~~~~~~测下cDNA浓度都在120以上,qpcr模板都是两微升,帮忙分析下原因吧,谢谢哈
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努力打败一切
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yangjingjing

木虫 (正式写手)

送红花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by yb19841014 at 2013-07-21 21:03:54
肯定是有非特异的扩增,只不过跑电泳看不到而已

是吗?可是~上次换了体系没问题了,那个非特异的不见了,只有80的了。可是这次又是这样了,郁闷啊~~~~还有,为啥我的另外的引物,溶解曲线出现倒峰,而且吧非特异峰多,不同样品溶解曲线峰值还不在同一点上,为嘛啊?引物不行吗?
努力打败一切
5楼2013-07-23 00:11:06
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唐朝豪放男

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 对头,引物不能反复冻融 2013-07-19 12:04:20
引物反复冻融多次,已经变质了,你80的峰是引物二聚体

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2013-07-19 09:00:59
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yb19841014

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖应助! 2013-07-21 23:10:47
肯定是有非特异的扩增,只不过跑电泳看不到而已

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

3楼2013-07-21 21:03:54
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yangjingjing

木虫 (正式写手)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 唐朝豪放男 at 2013-07-19 09:00:59
引物反复冻融多次,已经变质了,你80的峰是引物二聚体

可是普通PCR为什么看不出来呢,而且上次用了别的实验室的体系,做出来没有那种奇怪的峰
努力打败一切
4楼2013-07-23 00:07:48
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