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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR条件一样为什么结果有差
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莊___

木虫 (初入文坛)

[求助] PCR条件一样为什么结果有差 已有3人参与

这两个文件2014-2-19-18S下.tif是下午做的，做了一个PCR的退火温度筛选，2000bp的marker旁边是57℃的，然后选择了这个温度，晚上同样的条件又PCR一次，结果出现了2014-2-1918s-下；上.tif这个状况，没有跑出条带了，请问这是为什么呢？条件都没有变化，引物和模板也是一样的。
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  • 附件 1 : 2014-2-19-18S下.tif
    • 2014-02-19 21:47:43, 524.93 K
  • 附件 2 : 2014-2-1918s-下；上.tif
    • 2014-02-19 21:48:03, 523.73 K

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1楼 2014-02-19 21:52:11
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俗妮儿~

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
莊___: 金币+5, ★有帮助, 都是混在一起加的，连模板都混一起了，就是酶是分开加的 2014-02-21 16:43:05
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-03-30 00:28:56
你是不是没加模板或者buffer……
建议你再做一次，这一次体系全都加在一起，然后分装，再加模板和酶，这样可以避免一部分系统误差
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4楼2014-02-20 11:40:53
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-02-20 00:05:50
莊___: 金币+10, ★有帮助 2014-02-20 10:20:09
我们做标记PCR也会出现这种情况，同样条件无法重复。有时机器会出问题，建议你再做一次，若还是不行建议重新摸一下条件。
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hehe
2楼2014-02-19 22:09:56
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forrestgump

新虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2014-02-20 00:05:57
莊___: 金币+5, ★有帮助 2014-02-20 10:20:24
这个就是PCR的不稳定性，再说你也很难早就2个完全一样的环境啊，孔不一样都不行。
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3楼2014-02-19 22:32:48
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