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PCR条件一样为什么结果有差
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莊___
木虫
(初入文坛)
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虫号: 1694922
注册: 2012-03-16
专业: 微生物生理与生物化学
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PCR条件一样为什么结果有差
已有3人参与
这两个文件2014-2-19-18S下.tif是下午做的,做了一个PCR的退火温度筛选,2000bp的marker旁边是57℃的,然后选择了这个温度,晚上同样的条件又PCR一次,结果出现了2014-2-1918s-下;上.tif这个状况,没有跑出条带了,请问这是为什么呢?条件都没有变化,引物和模板也是一样的。
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2014-2-19-18S下.tif
2014-02-19 21:47:43, 524.93 K
附件 2 :
2014-2-1918s-下;上.tif
2014-02-19 21:48:03, 523.73 K
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1楼
2014-02-19 21:52:11
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俗妮儿~
银虫
(正式写手)
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专业: 微生物生理与生物化学
【答案】应助回帖
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有帮助, 都是混在一起加的,连模板都混一起了,就是酶是分开加的
2014-02-21 16:43:05
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流!
2014-03-30 00:28:56
你是不是没加模板或者buffer……
建议你再做一次,这一次体系全都加在一起,然后分装,再加模板和酶,这样可以避免一部分系统误差
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4楼
2014-02-20 11:40:53
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lvbobo823
铁杆木虫
(正式写手)
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虫号: 819723
注册: 2009-07-31
性别: GG
专业: 植物遗传学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
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2014-02-20 00:05:50
莊___: 金币+10,
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有帮助
2014-02-20 10:20:09
我们做标记PCR也会出现这种情况,同样条件无法重复。有时机器会出问题,建议你再做一次,若还是不行建议重新摸一下条件。
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hehe
2楼
2014-02-19 22:09:56
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forrestgump
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专业: 动物资源与保护
【答案】应助回帖
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2014-02-20 00:05:57
莊___: 金币+5,
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2014-02-20 10:20:24
这个就是PCR的不稳定性,再说你也很难早就2个完全一样的环境啊,孔不一样都不行。
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3楼
2014-02-19 22:32:48
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