应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 各位大侠，荧光定量中怎么设置检测荧光的温度呢
81/1返回列表
查看: 2403  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

qureen

新虫 (初入文坛)

[求助] 各位大侠，荧光定量中怎么设置检测荧光的温度呢

各位大侠，我看到说提高检测荧光的温度可以避免二聚体的产生，请问这个荧光检测温度怎么设置呢？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-09-06 15:54:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hl16010921

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-09-10 15:13:46
raeltime-PCR？你确定说法是提高检测荧光温度？还是提高退火温度的意思？因为即使荧光检测部分不工作（检测荧光温度无视）PCR条件不变，二聚体的产生就不变吧。LZ说的更详细些。
赞一下 回复此楼
2楼2013-09-10 14:42:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qureen

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by hl16010921 at 2013-09-10 14:42:44
raeltime-PCR？你确定说法是提高检测荧光温度？还是提高退火温度的意思？因为即使荧光检测部分不工作（检测荧光温度无视）PCR条件不变，二聚体的产生就不变吧。LZ说的更详细些。

我是想提高检测荧光的温度，设计了好几对引物，但做荧光定量时都有二聚体，想提高温度不检测二聚体，不知是否可行？
赞一下 回复此楼
3楼2013-09-22 23:34:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hl16010921

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
qureen: 金币+1, ★有帮助 2013-09-23 14:52:08
两步法就两个温度，解链温度（不能检测），退火和延伸温度（一般为60度，检测荧光），如果要改变检测温度必然需要改变退火和延伸温度，或者干脆改为三步法，然后调整退火温度（有人直接用延伸温度检测。。。）
赞一下 回复此楼
4楼2013-09-23 10:45:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
qureen: 金币+1, ★有帮助 2013-09-23 14:51:57
可不可以先做常规PCR，看退火温度是多少，两步法温度也有60度，如果60度还有很多引物二聚体，那设计真的改改
赞一下 回复此楼
行至水穷处，坐看云起时
5楼2013-09-23 11:27:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qureen

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by hl16010921 at 2013-09-23 10:45:18
两步法就两个温度，解链温度（不能检测），退火和延伸温度（一般为60度，检测荧光），如果要改变检测温度必然需要改变退火和延伸温度，或者干脆改为三步法，然后调整退火温度（有人直接用延伸温度检测。。。）

这个具体怎么设置呢，请指导下！
赞一下 回复此楼
6楼2013-09-23 14:49:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qureen

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by pennchem at 2013-09-23 11:27:15
可不可以先做常规PCR，看退火温度是多少，两步法温度也有60度，如果60度还有很多引物二聚体，那设计真的改改

我做一般PCR的温度是不到60度，是换引物吗？都设计好多对了，二聚体始终都有
赞一下 回复此楼
7楼2013-09-23 14:51:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hl16010921

木虫 (正式写手)
1.我们一般设计realtime PCR引物Tm都是60度左右，实在不好再调整PCR条件。（设定为60度，是为了一次可以检多个基因，并同内参的条件一致）
2。我们一般先跑普通PCR（但用realtime PCR的条件），如果有引物二聚体先降低引物浓度，不行再改为常规的三步法摸引物的退火温度（有梯度模块的PCR仪，很快就会搞定）
3.根据三步法的条件修改荧光PCR仪的设定。
以上都不行只能重新设计引物了。另外使用内参的话，要同时检测同等条件下内参的扩增情况。
赞一下 回复此楼
8楼2013-09-23 19:30:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 qureen 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭