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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 用荧光倒置显微镜怎样进行荧光蛋白的定量检测
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blueskylei

木虫 (正式写手)

[求助] 用荧光倒置显微镜怎样进行荧光蛋白的定量检测

要在微流控芯片中进行荧光蛋白的定量检测，用荧光倒置显微镜怎样进行定量检测呢，请各位大侠支招啊！
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幸福在于不断追求！
1楼 2011-10-10 23:14:39
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lzhwin

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

blueskylei(金币+1): 谢谢 2011-10-12 10:26:03
我们做实验，一般不会对荧光蛋白进行定量，如果要定量可能酶标仪会更好一些，荧光显微镜通过标定荧光强度的方法非常不准
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2楼2011-10-11 14:29:01
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blueskylei

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lzhwin at 2011-10-11 14:29:01:
我们做实验，一般不会对荧光蛋白进行定量，如果要定量可能酶标仪会更好一些，荧光显微镜通过标定荧光强度的方法非常不准

荧光显微镜通过标定荧光强度的方法是怎么做的呢？请详细介绍下
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幸福在于不断追求！
3楼2011-10-11 19:32:47
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lzhwin

木虫 (正式写手)
★ ★
西湖醉鱼(金币+2): 欢迎常来 2011-10-12 20:28:44
引用回帖:
3楼: Originally posted by blueskylei at 2011-10-11 19:32:47:
荧光显微镜通过标定荧光强度的方法是怎么做的呢？请详细介绍下

我不知道你的样品到底是什么东西。
我们在荧光显微镜下看的一般都是表达了荧光蛋白的细胞，用相同条件的条件对细胞进行拍照，然后将得到的荧光照片用显微镜自带的软件进行选择，就软件就会读出选择位置的灰度值，这个就是荧光强度了，如果你的显微镜是进口四大品牌中的一个那肯定有这个功能，请自己打电话向工程师咨询。如果不是，很多软件也有这个功能比如IPP IPI  imageJ（这个是免费的）。

强烈不建议这么做，不知道你到底想做什么，想定量我们更倾向于测luciferase或者GUS的酶活，这个会准很多。
如果一定要测请注意几点：
1、条件一定要一致（ccd增益、曝光时间、激发光强度等等）
2、最好能有正负对照，正对照用于确定线性最高点，负对照用来扣除本底。
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4楼2011-10-12 16:27:34
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jx19891116

银虫 (小有名气)
您好，我现在也在用荧光倒置显微镜对荧光蛋白进行定量分析，看到你的贴子，请问，你的这个问题是怎么解决的？我们的仪器是国产的，仪器没有自带转换灰度值的功能，如果要用IPP，Image J等软件怎么处理？谢谢！
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5楼2014-12-10 08:48:24
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