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blueskylei

木虫 (正式写手)

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[求助] 用荧光倒置显微镜怎样进行荧光蛋白的定量检测

要在微流控芯片中进行荧光蛋白的定量检测，用荧光倒置显微镜怎样进行定量检测呢，请各位大侠支招啊！

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幸福在于不断追求！

1楼2011-10-10 23:14:39

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

lzhwin

木虫 (正式写手)

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★ ★
西湖醉鱼(金币+2): 欢迎常来 2011-10-12 20:28:44

引用回帖:

3楼: Originally posted by blueskylei at 2011-10-11 19:32:47:
荧光显微镜通过标定荧光强度的方法是怎么做的呢？请详细介绍下

我不知道你的样品到底是什么东西。
我们在荧光显微镜下看的一般都是表达了荧光蛋白的细胞，用相同条件的条件对细胞进行拍照，然后将得到的荧光照片用显微镜自带的软件进行选择，就软件就会读出选择位置的灰度值，这个就是荧光强度了，如果你的显微镜是进口四大品牌中的一个那肯定有这个功能，请自己打电话向工程师咨询。如果不是，很多软件也有这个功能比如IPP IPI imageJ（这个是免费的）。

强烈不建议这么做，不知道你到底想做什么，想定量我们更倾向于测luciferase或者GUS的酶活，这个会准很多。
如果一定要测请注意几点：
1、条件一定要一致（ccd增益、曝光时间、激发光强度等等）
2、最好能有正负对照，正对照用于确定线性最高点，负对照用来扣除本底。