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blueskylei

木虫 (正式写手)

[求助] 用荧光倒置显微镜怎样进行荧光蛋白的定量检测

要在微流控芯片中进行荧光蛋白的定量检测,用荧光倒置显微镜怎样进行定量检测呢,请各位大侠支招啊!
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幸福在于不断追求!
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lzhwin

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

blueskylei(金币+1): 谢谢 2011-10-12 10:26:03
我们做实验,一般不会对荧光蛋白进行定量,如果要定量可能酶标仪会更好一些,荧光显微镜通过标定荧光强度的方法非常不准
2楼2011-10-11 14:29:01
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blueskylei

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by lzhwin at 2011-10-11 14:29:01:
我们做实验,一般不会对荧光蛋白进行定量,如果要定量可能酶标仪会更好一些,荧光显微镜通过标定荧光强度的方法非常不准

荧光显微镜通过标定荧光强度的方法是怎么做的呢?请详细介绍下
幸福在于不断追求!
3楼2011-10-11 19:32:47
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lzhwin

木虫 (正式写手)

★ ★
西湖醉鱼(金币+2): 欢迎常来 2011-10-12 20:28:44
引用回帖:
3楼: Originally posted by blueskylei at 2011-10-11 19:32:47:
荧光显微镜通过标定荧光强度的方法是怎么做的呢?请详细介绍下

我不知道你的样品到底是什么东西。
我们在荧光显微镜下看的一般都是表达了荧光蛋白的细胞,用相同条件的条件对细胞进行拍照,然后将得到的荧光照片用显微镜自带的软件进行选择,就软件就会读出选择位置的灰度值,这个就是荧光强度了,如果你的显微镜是进口四大品牌中的一个那肯定有这个功能,请自己打电话向工程师咨询。如果不是,很多软件也有这个功能比如IPP IPI  imageJ(这个是免费的)。

强烈不建议这么做,不知道你到底想做什么,想定量我们更倾向于测luciferase或者GUS的酶活,这个会准很多。
如果一定要测请注意几点:
1、条件一定要一致(ccd增益、曝光时间、激发光强度等等)
2、最好能有正负对照,正对照用于确定线性最高点,负对照用来扣除本底。
4楼2011-10-12 16:27:34
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jx19891116

银虫 (小有名气)

您好,我现在也在用荧光倒置显微镜对荧光蛋白进行定量分析,看到你的贴子,请问,你的这个问题是怎么解决的?我们的仪器是国产的,仪器没有自带转换灰度值的功能,如果要用IPP,Image J等软件怎么处理?谢谢!
5楼2014-12-10 08:48:24
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