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XUMIN6891

金虫 (初入文坛)

[求助] 请教一下pcr扩出的这到底对不对啊?

各位高人请指导小妹一下,我要扩出的片段大小是357bp,我用的2000bp的Market,按说我跑出的条带应该在250bp-500bp之间就对,但是我一直扩出来的在250bp以上一点点,这是不是就不对啊,因为我用另外一对引物扩出的片段也是357bp,他跑出来条带就在250bp-500bp之间。所以我一直觉得我扩出来的不对,有谁遇见过这种情况吗?指导指导一下吧!真郁闷,做好长时间了梯度降落PCR都用了结果就是没出来!郁闷!
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wanglei512

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

首先你要排除这不是引物二聚体,
这个不能说是不对,marker不一定准确,你可以直接送PCR产物去测序,或者链到pGEM-Teasy 载体上进行测序,根据测序结果判断。
2楼2011-11-09 22:22:57
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wanglei512

金虫 (正式写手)

我估计你这是正确的,应该没问题,可以的话把你图片传上来
3楼2011-11-09 22:24:24
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XUMIN6891

金虫 (初入文坛)

明天吧,我把图片拷一个传上去,然后再让你们帮我看看,谢谢了!
4楼2011-11-09 22:28:17
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snzydong

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

应该没有问题 marker不见得准 只要比250bp大 应该就不是引物二聚体 你应该回收以后去测序看看
5楼2011-11-10 08:49:07
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冯军厂

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

可以换个Marker试试,用100bp的看一下效果,然后再把你两次引物扩增的产物在一块胶上跑一下,比较一下条带大小。
6楼2011-11-10 09:07:59
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cxl_yll

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

我遇见过 莫有问题 测序是对的
7楼2011-11-10 11:49:53
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zhaofengliu

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
2楼: Originally posted by wanglei512 at 2011-11-09 22:22:57:
首先你要排除这不是引物二聚体,
这个不能说是不对,marker不一定准确,你可以直接送PCR产物去测序,或者链到pGEM-Teasy 载体上进行测序,根据测序结果判断。

支持测序,或者选用1000的marker,其带差为100bp,可以准确判断你的条带。
人生是个过程,经历都是财富!
8楼2011-11-10 12:01:01
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担菜书生

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

换个marker试试看
9楼2011-11-10 14:04:36
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yjingmo

木虫 (著名写手)

修筑

【答案】应助回帖

最好发图看下,说不清的,加样等都会有影响的
如果我成功了,那么我比别人幸运;如果我失败了,那么我还不够努力!
10楼2011-11-10 14:29:11
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