应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » tail-PCR问题，求指导
101/1返回列表
查看: 2807  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看

dzwd

金虫 (小有名气)

[求助] tail-PCR问题，求指导

第一次做有特异条带。同一条件，重复了两次都没有特异条带。是操作问题吗？应该在哪方面改进？高手指点下吧
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-03-24 19:21:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖置顶 ( 共有1个 )

atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
西瓜: 金币+5, MolEPI+1, 有条有理~普通PCR重复性是不错，tail-PCR有时候真就看人品。。 2012-03-25 16:13:49
dzwd: 金币+4, ★★★★★最佳答案, 谢谢啊 2012-03-25 21:57:38
嗯.......
不是说没有原因，而是你这种情况，原因可能太多，我们一般认为如果能做出来一次，就说明体系和程序是木有问题的，重复不出来的话，我们会考虑：
    1. 引物降解、dNTP降解等，所以会把体系都换一遍
    2. 模板也降解，重新提取后再做
    3. 机子最近出了问题，换别人的机子试试
    4. TAIL-PCR本来一次时间就要3-4个小时、如果你第一轮扩增时间过长，酶能不能抗住也还是问题呢
    5. 实在不行，就回去暴吃一顿、蒙头睡一觉，心情好些再继续
PCR本来就是概率时间，就算什么都优化了完美了，也不一定100%重复出来哦
赞一下(1人) 回复此楼
Let God do with it as He wills
6楼2012-03-25 09:12:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气
★
西瓜: 金币+1, 鼓励交流！PCR是很神奇…… 2012-03-25 16:12:20
呵呵呵呵呵呵
同一条件，重复不出来，很正常啊，你需要考虑人品、机子、样品降解等各种因素哦，把所有能换的东西都换成新的，再P一下 P不出来的话，回去睡一觉，休息两三天，默默攒点人品，就会出来了，嘿嘿
赞一下 回复此楼
Let God do with it as He wills
2楼2012-03-24 19:32:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wocooo

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你这第一次是指的什么 第一轮扩增？
赞一下 回复此楼
3楼2012-03-24 23:38:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dzwd

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by wocooo at 2012-03-24 23:38:06:
你这第一次是指的什么 第一轮扩增？

不是，是第一次做。第一次完整PCR之后，发现有条带。重复两次后发现没有了。
赞一下 回复此楼
4楼2012-03-25 08:34:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dzwd

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by atlanticwi at 2012-03-24 19:32:22:
呵呵呵呵呵呵
同一条件，重复不出来，很正常啊，你需要考虑人品、机子、样品降解等各种因素哦，把所有能换的东西都换成新的，再P一下 P不出来的话，回去睡一觉，休息两三天，默默攒点人品，就会出来了，嘿嘿

没有原因的吗？
回复此楼
5楼2012-03-25 08:34:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
dzwd: 金币+3, ★★★很有帮助 2012-03-25 21:58:01
很正常，TAIL-PCR有时靠运气，
赞一下 回复此楼
jiayoubashaonian
7楼2012-03-25 11:36:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

aoaoshch

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
多加点模板DNA试试吧。换别的随机引物试试，TaKaRa的比较好用。TAIL有时候就要运气的。把你的PCR产物保存好，以备下轮使用。GOOD LUCK !
赞一下 回复此楼
8楼2012-03-26 21:45:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zgb1982

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这个真是不好说原因，也有的前几次都出不来，重复几次就出来了，没有为什么啊。说不定是你后两轮的模板稀释的不够多
赞一下 回复此楼
9楼2012-03-26 22:49:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

caidan1385

新虫 (初入文坛)
请问你做Tail-PCR时，3~4个简并引物是混合在一起与左臂或右臂特异性引物进行pcr反应的还是每个简并引物都要与左臂或右臂特异性引物单独反应啊？求指点下，谢谢了
赞一下 回复此楼
10楼2012-05-23 12:53:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 学员x4ipC2 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 306求调剂 +5 来好运来来来 2026-03-22 5/250 2026-03-22 16:17 by BruceLiu320
[考研] 319求调剂 +4 小力气珂珂 2026-03-20 4/200 2026-03-22 15:53 by ColorlessPI
[考研] 298求调剂一志愿211 +3 上岸6666@ 2026-03-20 3/150 2026-03-22 15:50 by ColorlessPI
[考研] 一志愿东华大学化学070300，求调剂 +6 2117205181 2026-03-21 7/350 2026-03-22 14:59 by allen-yin
[考研] 354求调剂 +7 Tyoumou 2026-03-18 10/500 2026-03-22 11:11 by 人来盛
[考研] 资源与环境 调剂申请(333分) +5 holy J 2026-03-21 5/250 2026-03-21 22:42 by Catalysis25
[考研] 【考研调剂】化学专业 281分，一志愿四川大学，诚心求调剂 +11 吃吃吃才有意义 2026-03-19 11/550 2026-03-21 18:23 by 学员8dgXkO
[考研] 求调剂 +3 .m.. 2026-03-21 4/200 2026-03-21 16:25 by barlinike
[基金申请] 学校已经提交到NSFC，还能修改吗？ 40+4 babangida 2026-03-19 9/450 2026-03-21 16:12 by babangida
[考研] 332求调剂 +3 凤凰院丁真 2026-03-20 3/150 2026-03-21 10:27 by luoyongfeng
[考研] 316求调剂 +6 梁茜雯 2026-03-19 6/300 2026-03-21 06:32 by Ecowxq666！
[考研] 一志愿中海洋材料工程专硕330分求调剂 +8 小材化本科 2026-03-18 8/400 2026-03-20 23:16 by JourneyLucky
[考研] 317求调剂 +5 申子申申 2026-03-19 9/450 2026-03-20 22:26 by JourneyLucky
[考研] 0817 化学工程 299分求调剂 有科研经历 有二区文章 +22 rare12345 2026-03-18 22/1100 2026-03-20 20:39 by zhukairuo
[考研] 295材料求调剂，一志愿武汉理工085601专硕 +5 Charlieyq 2026-03-19 5/250 2026-03-20 20:35 by JourneyLucky
[考研] 一志愿南理工085701环境302求调剂院校 +3 葵梓卫队 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:28 by zhukairuo
[考研] 298-一志愿中国农业大学-求调剂 +9 手机用户 2026-03-17 9/450 2026-03-20 14:24 by 无懈可击111
[考研] 生物学调剂招人！！！ +3 山海天岚 2026-03-17 4/200 2026-03-19 21:34 by 怎么释怀
[考研] 0703化学调剂 +4 18889395102 2026-03-18 4/200 2026-03-19 16:13 by 30660438
[考研] 本科郑州大学物理学院，一志愿华科070200学硕，346求调剂 +4 我不是一根葱 2026-03-18 4/200 2026-03-19 09:11 by 浮云166
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭