应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » tail-PCR问题，求指导
101/1返回列表
查看: 2856  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看

dzwd

金虫 (小有名气)

[求助] tail-PCR问题，求指导

第一次做有特异条带。同一条件，重复了两次都没有特异条带。是操作问题吗？应该在哪方面改进？高手指点下吧
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-03-24 19:21:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖置顶 ( 共有1个 )

atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
西瓜: 金币+5, MolEPI+1, 有条有理~普通PCR重复性是不错，tail-PCR有时候真就看人品。。 2012-03-25 16:13:49
dzwd: 金币+4, ★★★★★最佳答案, 谢谢啊 2012-03-25 21:57:38
嗯.......
不是说没有原因，而是你这种情况，原因可能太多，我们一般认为如果能做出来一次，就说明体系和程序是木有问题的，重复不出来的话，我们会考虑：
    1. 引物降解、dNTP降解等，所以会把体系都换一遍
    2. 模板也降解，重新提取后再做
    3. 机子最近出了问题，换别人的机子试试
    4. TAIL-PCR本来一次时间就要3-4个小时、如果你第一轮扩增时间过长，酶能不能抗住也还是问题呢
    5. 实在不行，就回去暴吃一顿、蒙头睡一觉，心情好些再继续
PCR本来就是概率时间，就算什么都优化了完美了，也不一定100%重复出来哦
赞一下(1人) 回复此楼
Let God do with it as He wills
6楼2012-03-25 09:12:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气
★
西瓜: 金币+1, 鼓励交流！PCR是很神奇…… 2012-03-25 16:12:20
呵呵呵呵呵呵
同一条件，重复不出来，很正常啊，你需要考虑人品、机子、样品降解等各种因素哦，把所有能换的东西都换成新的，再P一下 P不出来的话，回去睡一觉，休息两三天，默默攒点人品，就会出来了，嘿嘿
赞一下 回复此楼
Let God do with it as He wills
2楼2012-03-24 19:32:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wocooo

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你这第一次是指的什么 第一轮扩增？
赞一下 回复此楼
3楼2012-03-24 23:38:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dzwd

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by wocooo at 2012-03-24 23:38:06:
你这第一次是指的什么 第一轮扩增？

不是，是第一次做。第一次完整PCR之后，发现有条带。重复两次后发现没有了。
赞一下 回复此楼
4楼2012-03-25 08:34:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dzwd

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by atlanticwi at 2012-03-24 19:32:22:
呵呵呵呵呵呵
同一条件，重复不出来，很正常啊，你需要考虑人品、机子、样品降解等各种因素哦，把所有能换的东西都换成新的，再P一下 P不出来的话，回去睡一觉，休息两三天，默默攒点人品，就会出来了，嘿嘿

没有原因的吗？
回复此楼
5楼2012-03-25 08:34:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
dzwd: 金币+3, ★★★很有帮助 2012-03-25 21:58:01
很正常，TAIL-PCR有时靠运气，
赞一下 回复此楼
jiayoubashaonian
7楼2012-03-25 11:36:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

aoaoshch

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
多加点模板DNA试试吧。换别的随机引物试试，TaKaRa的比较好用。TAIL有时候就要运气的。把你的PCR产物保存好，以备下轮使用。GOOD LUCK !
赞一下 回复此楼
8楼2012-03-26 21:45:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zgb1982

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这个真是不好说原因，也有的前几次都出不来，重复几次就出来了，没有为什么啊。说不定是你后两轮的模板稀释的不够多
赞一下 回复此楼
9楼2012-03-26 22:49:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

caidan1385

新虫 (初入文坛)
请问你做Tail-PCR时，3~4个简并引物是混合在一起与左臂或右臂特异性引物进行pcr反应的还是每个简并引物都要与左臂或右臂特异性引物单独反应啊？求指点下，谢谢了
赞一下 回复此楼
10楼2012-05-23 12:53:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 学员x4ipC2 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂，一志愿材料科学与工程985，365分， +7 材化李可 2026-04-11 9/450 2026-04-12 01:09 by 秋豆菜芽
[考研] 299求调剂 +8 ZVVZ13 2026-04-08 8/400 2026-04-12 00:40 by 蓝云思雨
[考研] 211本科材料化工求调剂 +13 YHLAH 2026-04-11 14/700 2026-04-11 23:13 by 幸免 ..
[考研] 298求调剂 +5 残荷新柳 2026-04-07 5/250 2026-04-11 11:02 by 紫曦紫棋
[硕博家园] 新一代电子信息294求调剂 不挑学校 +6 Ytyt11 2026-04-09 7/350 2026-04-11 10:52 by AA小小木虫
[考研] 中药学调剂 初试324 +4 洋甘菊、 2026-04-10 6/300 2026-04-11 09:41 by gong120082
[考研] 本科西工大 324求调剂 +4 wysyjs25 2026-04-10 4/200 2026-04-10 20:00 by 来看流星雨10
[考研] 机械专368 有去处吗 +4 种大树 2026-04-10 4/200 2026-04-10 15:31 by jiajinhpu
[考研] 285求调剂 +9 AZMK 2026-04-07 11/550 2026-04-10 15:24 by AZMK
[考研] 环境专硕调剂 +16 会说话的肘子 2026-04-06 16/800 2026-04-10 10:30 by asy1wn
[考研] 调剂 +24 不逢春 2026-04-07 25/1250 2026-04-10 09:39 by 690616278
[考研] 367求调剂 +10 hffQAQ 2026-04-09 10/500 2026-04-09 18:06 by lijunpoly
[考博] 材料方向考博，求推荐 +3 言语aaa 2026-04-05 4/200 2026-04-08 22:22 by nxgogo
[考研] 专硕0854初试考材科基，求调剂 +7 3220548044 2026-04-06 10/500 2026-04-08 21:59 by hypershenger
[考研] 软件工程求调剂22软工296分求调剂，接受跨调 +4 yangchen2017 2026-04-08 5/250 2026-04-08 21:56 by 土木硕士招生
[考研] 一志愿211，化学学硕，310分，本科重点双非，求调剂 +10 努力奋斗112 2026-04-07 10/500 2026-04-08 15:01 by screening
[考研] 求调剂 +11 wwwwabcde 2026-04-07 11/550 2026-04-07 23:16 by JourneyLucky
[考研] 307求调剂 +3 Youth@@ 2026-04-07 3/150 2026-04-07 22:00 by hemengdong
[考研] 本科生物信息学，总分362 求07 08调剂 +6 q小倩1210 2026-04-06 6/300 2026-04-07 19:40 by macy2011
[考研] 348求调剂 +3 车厘子zzz 2026-04-05 3/150 2026-04-05 20:30 by 啵啵啵0119
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭