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atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
西瓜: 金币+5, MolEPI+1, 有条有理~普通PCR重复性是不错,tail-PCR有时候真就看人品。。 2012-03-25 16:13:49
dzwd: 金币+4, ★★★★★最佳答案, 谢谢啊 2012-03-25 21:57:38
嗯.......
不是说没有原因,而是你这种情况,原因可能太多,我们一般认为如果能做出来一次,就说明体系和程序是木有问题的,重复不出来的话,我们会考虑:
    1. 引物降解、dNTP降解等,所以会把体系都换一遍
    2. 模板也降解,重新提取后再做
    3. 机子最近出了问题,换别人的机子试试
    4. TAIL-PCR本来一次时间就要3-4个小时、如果你第一轮扩增时间过长,酶能不能抗住也还是问题呢
    5. 实在不行,就回去暴吃一顿、蒙头睡一觉,心情好些再继续
PCR本来就是概率时间,就算什么都优化了完美了,也不一定100%重复出来哦
Let God do with it as He wills
6楼2012-03-25 09:12:27
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