应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】TAIL-PCR 问题
111/1返回列表
查看: 3313  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

zhouheyi_2

铁虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】TAIL-PCR 问题

你好！我时植物所研二的学生。我最近在做TAIL-PCR扩增未知序列。我的体系如下：第一轮为25μL体系，其中gDNA 30ng 左右，dNTP 200μM，GC buffer 12.5μL，primer 0.15μM,随机引物为1μM。
第一轮的图如下：




1kb



第二轮为25μL体系，其中包括将第一轮产物稀释50倍，取1μL，dNTP 200μM，GC buffer 12.5μL，两个primer 0.15μM。图如下：



1kb


我想请问您是否遇到过这样的情况吗？我扩了很多次，可是都是这样，不知道究竟哪里有问题，不知道应该在那些地方改进。迫切希望得到您的指点。




关于Primer，我曾经用过这几个引物，扩出的第二轮条带如下：




      1kb
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

核酸生物学实验经验

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2011-03-12 22:16:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhangxn2010

木虫 (著名写手)
zhouheyi_2(金币+1): 2011-03-13 14:36:37
第一步基因组DNA是不是太多了?
赞一下 回复此楼
2楼2011-03-12 22:47:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhouheyi_2

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by zhouheyi_2 at 2011-03-12 22:16:24:
你好！我时植物所研二的学生。我最近在做TAIL-PCR扩增未知序列。我的体系如下：第一轮为25μL体系，其中gDNA 30ng 左右，dNTP 200μM，GC buffer 12.5μL，primer 0.15μM,随机引物为1μM。
第一轮的图如下：

...

我也有稀释过DNA约1倍左右，跑出来也是这样的图
赞一下 回复此楼
3楼2011-03-13 14:36:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pangzio

铁虫 (小有名气)

关于Tail-pcr

zhouheyi_2(金币+1): 2011-03-14 16:02:44
zhouheyi_2(金币+2): 2011-03-14 16:03:34
做Tail-PCR最好将你的基因组DNA提的质量好些，杂质去的干净一点。DNA可以少加一点，可以做几个浓度低度的摸索一下。对第一轮的条件好好的摸索一下，如果第一轮和第二轮扩增不出较清晰的、多条带的产物，就不要做第三轮的P了。
赞一下 回复此楼
4楼2011-03-14 03:47:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kdfight

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
我第一轮有带，但二、三轮同楼主的一样，是全弥散的，怎么回事呢
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2011-06-01 16:42:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhouheyi_2

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by kdfight at 2011-06-01 16:42:48:
我第一轮有带，但二、三轮同楼主的一样，是全弥散的，怎么回事呢

我也出现过这种情况，至今没有解决，不知道你找到原因没？
赞一下 回复此楼
6楼2011-06-03 12:08:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sunwei57

木虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
这是一个无解的题,很难找到真正的原因,我们遇到过多次也曾经问过刘耀光,他说他们从没遇到过,如果样少的话换Takara的Genome walking Kit,你们头有的是钱
赞一下 回复此楼
7楼2012-03-21 09:32:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xianglixie3

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
不是说第一轮 电泳不出图么？因为产物太多？
赞一下 回复此楼
8楼2014-03-15 16:22:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

薰衣草871110

新虫 (初入文坛)
你酶加了多少啊？
回复此楼
9楼2014-04-11 10:01:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

爆牙B

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我也遇到过这样的问题，后来发现是DNA质量不行。建议重新提DNA .
赞一下 回复此楼
10楼2014-08-11 10:50:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zxnju0102

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by zhouheyi_2 at 2011-03-13 14:36:18
我也有稀释过DNA约1倍左右，跑出来也是这样的图...

我遇到和楼主一样的问题，第二轮第三轮是涂抹状条带，不知楼主后来如何解决的
赞一下 回复此楼
11楼2014-11-26 15:39:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zhouheyi_2 的主题更新
111/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭