24小时热门版块排行榜    

查看: 3623  |  回复: 10

zhouheyi_2

铁虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】TAIL-PCR 问题

你好!我时植物所研二的学生。我最近在做TAIL-PCR扩增未知序列。我的体系如下:第一轮为25μL体系,其中gDNA 30ng 左右,dNTP 200μM,GC buffer 12.5μL,primer 0.15μM,随机引物为1μM。
第一轮的图如下:




1kb



第二轮为25μL体系,其中包括将第一轮产物稀释50倍,取1μL,dNTP 200μM,GC buffer 12.5μL,两个primer 0.15μM。图如下:



1kb


我想请问您是否遇到过这样的情况吗?我扩了很多次,可是都是这样,不知道究竟哪里有问题,不知道应该在那些地方改进。迫切希望得到您的指点。




关于Primer,我曾经用过这几个引物,扩出的第二轮条带如下:




      1kb




回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

核酸生物学实验经验

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

» 抢金币啦!回帖就可以得到:

查看全部散金贴

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhangxn2010

木虫 (著名写手)


zhouheyi_2(金币+1): 2011-03-13 14:36:37
第一步基因组DNA是不是太多了?
2楼2011-03-12 22:47:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhouheyi_2

铁虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by zhouheyi_2 at 2011-03-12 22:16:24:
你好!我时植物所研二的学生。我最近在做TAIL-PCR扩增未知序列。我的体系如下:第一轮为25μL体系,其中gDNA 30ng 左右,dNTP 200μM,GC buffer 12.5μL,primer 0.15μM,随机引物为1μM。
第一轮的图如下:

...

我也有稀释过DNA约1倍左右,跑出来也是这样的图
3楼2011-03-13 14:36:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pangzio

铁虫 (小有名气)


关于Tail-pcr

zhouheyi_2(金币+1): 2011-03-14 16:02:44
zhouheyi_2(金币+2): 2011-03-14 16:03:34
做Tail-PCR最好将你的基因组DNA提的质量好些,杂质去的干净一点。DNA可以少加一点,可以做几个浓度低度的摸索一下。对第一轮的条件好好的摸索一下,如果第一轮和第二轮扩增不出较清晰的、多条带的产物,就不要做第三轮的P了。
4楼2011-03-14 03:47:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kdfight

铜虫 (初入文坛)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
我第一轮有带,但二、三轮同楼主的一样,是全弥散的,怎么回事呢
5楼2011-06-01 16:42:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhouheyi_2

铁虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by kdfight at 2011-06-01 16:42:48:
我第一轮有带,但二、三轮同楼主的一样,是全弥散的,怎么回事呢

我也出现过这种情况,至今没有解决,不知道你找到原因没?
6楼2011-06-03 12:08:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sunwei57

木虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
这是一个无解的题,很难找到真正的原因,我们遇到过多次也曾经问过刘耀光,他说他们从没遇到过,如果样少的话换Takara的Genome walking Kit,你们头有的是钱
7楼2012-03-21 09:32:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xianglixie3

铜虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
不是说第一轮 电泳不出图么?因为产物太多?
8楼2014-03-15 16:22:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

薰衣草871110

新虫 (初入文坛)


你酶加了多少啊?
9楼2014-04-11 10:01:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

爆牙B

新虫 (初入文坛)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我也遇到过这样的问题,后来发现是DNA质量不行。建议重新提DNA .
10楼2014-08-11 10:50:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zxnju0102

铜虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by zhouheyi_2 at 2011-03-13 14:36:18
我也有稀释过DNA约1倍左右,跑出来也是这样的图...

我遇到和楼主一样的问题,第二轮第三轮是涂抹状条带,不知楼主后来如何解决的
11楼2014-11-26 15:39:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 zhouheyi_2 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 27/1350 2026-08-18 21:44 by Noways
[基金申请] 2027广东省杰青 +3 奶牛小黑 2026-08-15 9/450 2026-08-18 20:09 by 奶牛小黑
[基金申请] 朋友圈看到的 +4 wangzilk 2026-08-18 5/250 2026-08-18 19:25 by wangzilk
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +51 医学老男孩 2026-08-13 110/5500 2026-08-18 19:07 by icerianxia
[基金申请] 明天放榜? +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 时间戳变了,能看出什么问题? +8 基诺咪客 2026-08-17 11/550 2026-08-18 17:13 by 悠然熊猫
[基金申请] 重要消息,中午系统在维护 +9 yuleib84 2026-08-18 10/500 2026-08-18 16:52 by archvillain
[论文投稿] 投稿咨询 +4 wwm09 2026-08-17 6/300 2026-08-18 15:36 by wwm09
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +14 archvillain 2026-08-15 26/1300 2026-08-18 13:37 by phantomgost
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +13 Ldrop2023 2026-08-13 16/800 2026-08-18 12:25 by 淀粉搬运工
[基金申请] 快农历七夕节了,轻松一下,男人悄悄话,女施主请不要进来。 +4 Tide man 2026-08-14 5/250 2026-08-18 11:35 by Tide man
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +8 wangze12014 2026-08-14 10/500 2026-08-17 17:05 by xter9665
[基金申请] 今天系统多次维护,明天很可能放榜! +8 zju2000 2026-08-16 9/450 2026-08-17 12:20 by lmz0216
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] 结合人工智能,周易传统文化,filecode打分制来了,3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
信息提示
请填处理意见