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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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zhouheyi_2

铁虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】TAIL-PCR 问题

你好!我时植物所研二的学生。我最近在做TAIL-PCR扩增未知序列。我的体系如下:第一轮为25μL体系,其中gDNA 30ng 左右,dNTP 200μM,GC buffer 12.5μL,primer 0.15μM,随机引物为1μM。
第一轮的图如下:




1kb



第二轮为25μL体系,其中包括将第一轮产物稀释50倍,取1μL,dNTP 200μM,GC buffer 12.5μL,两个primer 0.15μM。图如下:



1kb


我想请问您是否遇到过这样的情况吗?我扩了很多次,可是都是这样,不知道究竟哪里有问题,不知道应该在那些地方改进。迫切希望得到您的指点。




关于Primer,我曾经用过这几个引物,扩出的第二轮条带如下:




      1kb




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zhangxn2010

木虫 (著名写手)


zhouheyi_2(金币+1): 2011-03-13 14:36:37
第一步基因组DNA是不是太多了?
2楼2011-03-12 22:47:20
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zhouheyi_2

铁虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by zhouheyi_2 at 2011-03-12 22:16:24:
你好!我时植物所研二的学生。我最近在做TAIL-PCR扩增未知序列。我的体系如下:第一轮为25μL体系,其中gDNA 30ng 左右,dNTP 200μM,GC buffer 12.5μL,primer 0.15μM,随机引物为1μM。
第一轮的图如下:

...

我也有稀释过DNA约1倍左右,跑出来也是这样的图
3楼2011-03-13 14:36:18
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pangzio

铁虫 (小有名气)


关于Tail-pcr

zhouheyi_2(金币+1): 2011-03-14 16:02:44
zhouheyi_2(金币+2): 2011-03-14 16:03:34
做Tail-PCR最好将你的基因组DNA提的质量好些,杂质去的干净一点。DNA可以少加一点,可以做几个浓度低度的摸索一下。对第一轮的条件好好的摸索一下,如果第一轮和第二轮扩增不出较清晰的、多条带的产物,就不要做第三轮的P了。
4楼2011-03-14 03:47:55
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kdfight

铜虫 (初入文坛)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
我第一轮有带,但二、三轮同楼主的一样,是全弥散的,怎么回事呢
5楼2011-06-01 16:42:48
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zhouheyi_2

铁虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by kdfight at 2011-06-01 16:42:48:
我第一轮有带,但二、三轮同楼主的一样,是全弥散的,怎么回事呢

我也出现过这种情况,至今没有解决,不知道你找到原因没?
6楼2011-06-03 12:08:02
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sunwei57

木虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
这是一个无解的题,很难找到真正的原因,我们遇到过多次也曾经问过刘耀光,他说他们从没遇到过,如果样少的话换Takara的Genome walking Kit,你们头有的是钱
7楼2012-03-21 09:32:27
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xianglixie3

铜虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
不是说第一轮 电泳不出图么?因为产物太多?
8楼2014-03-15 16:22:57
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薰衣草871110

新虫 (初入文坛)


你酶加了多少啊?
9楼2014-04-11 10:01:42
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爆牙B

新虫 (初入文坛)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我也遇到过这样的问题,后来发现是DNA质量不行。建议重新提DNA .
10楼2014-08-11 10:50:50
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zxnju0102

铜虫 (小有名气)



小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by zhouheyi_2 at 2011-03-13 14:36:18
我也有稀释过DNA约1倍左右,跑出来也是这样的图...

我遇到和楼主一样的问题,第二轮第三轮是涂抹状条带,不知楼主后来如何解决的
11楼2014-11-26 15:39:07
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