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dzwd金虫 (小有名气)
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[求助]
tail-PCR问题，求指导
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| 第一次做有特异条带。同一条件，重复了两次都没有特异条带。是操作问题吗？应该在哪方面改进？高手指点下吧 |
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 【分子生物】EPI帖 |
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atlanticwi
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【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
西瓜: 金币+5, MolEPI+1, 有条有理~普通PCR重复性是不错，tail-PCR有时候真就看人品。。 2012-03-25 16:13:49
dzwd: 金币+4, ★★★★★最佳答案, 谢谢啊 2012-03-25 21:57:38
西瓜: 金币+5, MolEPI+1, 有条有理~普通PCR重复性是不错，tail-PCR有时候真就看人品。。 2012-03-25 16:13:49
dzwd: 金币+4, ★★★★★最佳答案, 谢谢啊 2012-03-25 21:57:38
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嗯....... 不是说没有原因，而是你这种情况，原因可能太多，我们一般认为如果能做出来一次，就说明体系和程序是木有问题的，重复不出来的话，我们会考虑： 1. 引物降解、dNTP降解等，所以会把体系都换一遍 2. 模板也降解，重新提取后再做 3. 机子最近出了问题，换别人的机子试试 4. TAIL-PCR本来一次时间就要3-4个小时、如果你第一轮扩增时间过长，酶能不能抗住也还是问题呢 5. 实在不行，就回去暴吃一顿、蒙头睡一觉，心情好些再继续  PCR本来就是概率时间，就算什么都优化了完美了，也不一定100%重复出来哦 |
6楼2012-03-25 09:12:27
atlanticwi
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dzwd
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