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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 求助：酶切的疑惑
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

[求助] 求助：酶切的疑惑 已有3人参与

最近做酶切，老是切不好，求帮助。
（1）回收不到东西：图1是回收之前的带。图2是回收之后的带，已经弥散。


（2）做转化鉴定，发现原来质粒未酶切完全。但是回收后的条带有稍微的弥散，这是什么原因？如图3.

（3）图4中圆圈指示的区域是什么？是弥散的还是。。。。？？

望解答。急求。

求助：酶切的疑惑
图1


求助：酶切的疑惑-1
图2


求助：酶切的疑惑-2
图3


求助：酶切的疑惑-3
图4
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1楼 2014-04-04 20:32:03
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d00614028

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
鬼羽帝魂: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-04-05 10:20:12
西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-04-05 10:57:51
鬼羽帝魂: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-04-08 21:45:41
1. 回收不到东西： 看看你的TAE的pH值是否正确，我们实验室曾经有一次TAE 的PH值不正确导致回收不了DNA。另外你胶回收的洗脱液用的是什么，是水么？洗脱液的PH好像要在8左右，保持碱性，要不然洗脱不下来。
2. 未酶切完全，回收回来的可能就有质粒，你那弥散可能就是质粒。
3. 你圈的东西是不是因为跑胶的问题导致的呢，看你胶配的不是很好，另外，给个建议，不要用这么大的孔来跑，我觉得这样会导致弥散严重，建议用正常的胶回收孔来跑（个人建议）。
  希望对你有帮助。
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2楼2014-04-05 10:01:41
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by d00614028 at 2014-04-05 10:01:41
1. 回收不到东西： 看看你的TAE的pH值是否正确，我们实验室曾经有一次TAE 的PH值不正确导致回收不了DNA。另外你胶回收的洗脱液用的是什么，是水么？洗脱液的PH好像要在8左右，保持碱性，要不然洗脱不下来。
2. 未酶 ...

谢谢。        我是用试剂盒里的Eluent洗脱的。   回收的质粒弥散是不是降解了？
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3楼2014-04-05 10:19:57
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d00614028

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-04-05 10:19:57
谢谢。        我是用试剂盒里的Eluent洗脱的。   回收的质粒弥散是不是降解了？...

你这回收的是质粒还是酶切产物啊，我晕了，要是质粒的话质粒形态差不多就是那样的，酶切产物的话  你不是说你的质粒未完全酶切开么，混有了质粒大概就是那样了，  DNA做个酶切胶回收还不至于降解的。
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4楼2014-04-05 10:56:31
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你要那么多酶切产物？若真要那么多，大体系切，直接过柱回收就好

[ 发自小木虫客户端 ]
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5楼2014-04-05 19:52:14
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by d00614028 at 2014-04-05 10:56:31
你这回收的是质粒还是酶切产物啊，我晕了，要是质粒的话质粒形态差不多就是那样的，酶切产物的话  你不是说你的质粒未完全酶切开么，混有了质粒大概就是那样了，  DNA做个酶切胶回收还不至于降解的。...

但是酶切回收之后，图2就是结果，降解了，原因未知。
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6楼2014-04-07 11:42:29
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-04-05 19:52:14
你要那么多酶切产物？若真要那么多，大体系切，直接过柱回收就好

我切了10ug，但最后也就得到了几百ng，。
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7楼2014-04-07 11:43:14
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-04-07 11:43:14
我切了10ug，但最后也就得到了几百ng，。...

可能问题出在回收环节

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8楼2014-04-07 15:42:56
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-04-07 15:42:56
可能问题出在回收环节
...

回收按步骤来的，最后没有好结果 ，好桑心。
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9楼2014-04-08 15:41:45
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
9楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-04-08 15:41:45
回收按步骤来的，最后没有好结果 ，好桑心。...

建议用质粒柱子回收

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10楼2014-04-08 18:33:51
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