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草鹿八千留

银虫 (初入文坛)

[求助] 求助各位高人,关于酶切和连接转化的问题

我的蛋白长度为85个残基,DNA条带应该为255bp。
    酶切回收以后跑电泳条带显示正常。连接转化以后,长出三个菌落,做了PCR screen然后跑dna胶发现三个条带相同但都不到100。不过酶切回收了以后将产物放置了4度有三四天左右的时间,请问这会不会是实验失败的原因呢?
    本人今年大四,刚进实验室做毕设,对很多问题都不甚了解,望能遇到高手指导!多谢!
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zgb1982

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

草鹿八千留(金币+2): 2011-04-26 09:49:56
放4度几天没太大问题,不过才长了三个也太少了,应该是没有连接成功
2楼2011-04-25 22:50:40
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草鹿八千留

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by zgb1982 at 2011-04-25 22:50:40:
放4度几天没太大问题,不过才长了三个也太少了,应该是没有连接成功

但是为什么三个都同时减少了呢,就算ligation有问题也不至于切短吧?
3楼2011-04-26 09:52:51
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zgb1982

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
reasonspare(金币+2): 谢谢分享 2011-04-26 11:07:20
可能你PCR的东西根本什么都不是,不到100BP,你两端引物加起来就多少BP了啊,应该不是减短的问题。再连一次吧,可以多连会。或者你提质粒酶切看看或者你测序看看是什么东西,如果你想知道是什么的话。觉得没必要,
4楼2011-04-26 11:03:15
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zgb1982

木虫 (正式写手)

其实你可以问下实验室的师兄姐啊,不知道你是怎么做的,说不清楚。
5楼2011-04-26 11:06:49
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