应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助各位高人，关于酶切和连接转化的问题
51/1返回列表
查看: 1028  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

草鹿八千留

银虫 (初入文坛)

[求助] 求助各位高人，关于酶切和连接转化的问题

我的蛋白长度为85个残基，DNA条带应该为255bp。
    酶切回收以后跑电泳条带显示正常。连接转化以后，长出三个菌落，做了PCR screen然后跑dna胶发现三个条带相同但都不到100。不过酶切回收了以后将产物放置了4度有三四天左右的时间，请问这会不会是实验失败的原因呢？
    本人今年大四，刚进实验室做毕设，对很多问题都不甚了解，望能遇到高手指导！多谢！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-04-25 21:26:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zgb1982

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

草鹿八千留(金币+2): 2011-04-26 09:49:56
放4度几天没太大问题，不过才长了三个也太少了，应该是没有连接成功
赞一下 回复此楼
2楼2011-04-25 22:50:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

草鹿八千留

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by zgb1982 at 2011-04-25 22:50:40:
放4度几天没太大问题，不过才长了三个也太少了，应该是没有连接成功

但是为什么三个都同时减少了呢，就算ligation有问题也不至于切短吧？
赞一下 回复此楼
3楼2011-04-26 09:52:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zgb1982

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
reasonspare(金币+2): 谢谢分享 2011-04-26 11:07:20
可能你PCR的东西根本什么都不是，不到100BP，你两端引物加起来就多少BP了啊，应该不是减短的问题。再连一次吧，可以多连会。或者你提质粒酶切看看或者你测序看看是什么东西，如果你想知道是什么的话。觉得没必要，
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-04-26 11:03:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zgb1982

木虫 (正式写手)
其实你可以问下实验室的师兄姐啊，不知道你是怎么做的，说不清楚。
赞一下 回复此楼
5楼2011-04-26 11:06:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 草鹿八千留 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭