应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » AFLP酶切连接 求高人指点啊
121/2返回列表12下一页
查看: 1879  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

wskxbxf

新虫 (小有名气)

[交流] AFLP酶切连接 求高人指点啊 已有5人参与

最近做AFLP酶切连接的条件摸索，我用的是植物材料 DNA提取的结果OD260/280都在1.8左右，双酶切用的NEB的EcoRI 和Mse I，酶切分别做了1-6h的梯度，DNA加了400ng左右，没有做DNA的梯度，用的酶切体系是20微升的，但是酶切结果 跑电泳之后，隐隐约约能看到弥散，这几个时间没什么区别，上样量已经用了10微升，但还是看不出来什么，试着做了一下连接，之后做的PCR，结果如果，不知道酶切的问题究竟该怎么解决，连接产物跑电泳也很不理想，如图，请高人指导啊

PCR结果



酶切连接结果电泳图
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-11-29 20:09:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wskxbxf

新虫 (小有名气)
引用回帖:
1楼: Originally posted by wskxbxf at 2011-11-29 20:09:10:
最近做AFLP酶切连接的条件摸索，我用的是植物材料 DNA提取的结果OD260/280都在1.8左右，双酶切用的NEB的EcoRI 和Mse I，酶切分别做了1-6h的梯度，DNA加了400ng左右，没有做DNA的梯度，用的酶切体系是20微升的，但 ...

没有高人指点 哎
回复此楼
2楼2011-11-30 10:14:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

7788945

银虫 (小有名气)
非高人想指点，但是。。
赞一下 回复此楼
3楼2011-11-30 11:05:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

schkk

至尊木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
PCR图是预扩增还是选择性扩增的结果啊？这个实验最后需要用大板的PAGE的测序胶作电泳的，琼脂糖分辩率不够，跑的效果基本也就这样了
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-12-05 19:34:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wskxbxf

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by schkk at 2011-12-05 19:34:04:
PCR图是预扩增还是选择性扩增的结果啊？这个实验最后需要用大板的PAGE的测序胶作电泳的，琼脂糖分辩率不够，跑的效果基本也就这样了

是预扩增的结果 我很困惑酶切连接的结果 求指点啊 不胜感激
赞一下 回复此楼
5楼2011-12-05 20:38:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xjtianying

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
我也是初学者，我想问一下，你继续做选扩了没有，可以继续做选扩试试，选扩是要用大板的PAGE 跑的……看看结果怎么样

[ Last edited by xjtianying on 2011-12-5 at 21:34 ]
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2011-12-05 21:33:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

schkk

至尊木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
那你作选扩吧，应该没什么问题，预扩弥散的状态看着不错，等把选扩作完了上结果再分析吧，现在看不出来什么的，连接后电泳是没什么可看的，量太小了，除非你浓缩一下后再电泳
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2011-12-05 21:55:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wskxbxf

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by xjtianying at 2011-12-05 21:33:23:
我也是初学者，我想问一下，你继续做选扩了没有，可以继续做选扩试试，选扩是要用大板的PAGE 跑的……看看结果怎么样
[ Last edited by xjtianying on 2011-12-5 at 21:34 ]

恩，最近准备做选择性扩增试试，结果到时候拿出来大家一起分享和讨论，我也是第一次做AFLP，以后有什么问题我们可以互相交流和沟通。
赞一下 回复此楼
8楼2011-12-06 10:12:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wskxbxf

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by schkk at 2011-12-05 21:55:16:
那你作选扩吧，应该没什么问题，预扩弥散的状态看着不错，等把选扩作完了上结果再分析吧，现在看不出来什么的，连接后电泳是没什么可看的，量太小了，除非你浓缩一下后再电泳

谢谢指导，最近准备做选扩，到时候再分析一下。
赞一下 回复此楼
9楼2011-12-06 10:14:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yueyangyy85

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+4): 鼓励交流！欢迎常来！ 2011-12-21 18:59:50
不知道你的问题解决了么，植物基因组本身含的次生代谢产物比较多，一般酶切的时间两小时左右，时间太长效果也效果不明显，弥散的还是可以的。选择性扩增时，引物退火温度要适当低些，不然引物二聚体会比较明显！
赞一下(2人) 回复此楼
10楼2011-12-21 11:59:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 wskxbxf 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] NSFC申报书里申请人简历中代表性论著还需要在申报书最后的附件里面再上传一遍吗 20+5 NSFC2026我来了 2026-03-10 14/700 2026-03-15 23:53 by 不负韶华的虎
[考研] 321求调剂 +3 大米饭！ 2026-03-15 3/150 2026-03-15 17:48 by 哈哈哈哈嘿嘿嘿
[考研] 0703 物理化学调剂 +3 我可以上岸的对� 2026-03-13 3/150 2026-03-15 17:32 by 小物理化学
[考研] 070305求调剂 +3 mlpqaz03 2026-03-14 4/200 2026-03-15 11:04 by peike
[考研] 材料080500调剂求收留 +3 一颗meteor 2026-03-13 3/150 2026-03-14 10:54 by peike
[考研] 330求调剂 +3 ?酱给调剂跪了 2026-03-13 3/150 2026-03-14 10:13 by JourneyLucky
[考研] 266求调剂 +4 学员97LZgn 2026-03-13 4/200 2026-03-14 08:37 by zhukairuo
[考研] b区环境工程求调剂 +4 Maps1 2026-03-10 6/300 2026-03-14 00:23 by JourneyLucky
[考研] 311求调剂 +8 zchqwer 2026-03-10 8/400 2026-03-14 00:01 by JourneyLucky
[考研] 材料工程,326分，求调剂 +6 KRSLSR 2026-03-10 6/300 2026-03-13 23:47 by JourneyLucky
[考研] 材料371求调剂 +9 鳄鱼? 2026-03-11 11/550 2026-03-13 22:53 by JourneyLucky
[考研] 材料专硕288分求调剂 一志愿211 +4 在家想你 2026-03-11 4/200 2026-03-13 22:49 by JourneyLucky
[考研] 302求调剂 +6 负心者当诛 2026-03-11 6/300 2026-03-13 16:11 by JourneyLucky
[考研] 工科278分求调剂 +5 周慢热啊 2026-03-12 7/350 2026-03-13 15:49 by JourneyLucky
[考研] 304求调剂（085602一志愿985） +12 化工人999 2026-03-09 12/600 2026-03-13 12:02 by JourneyLucky
[考研] 化工学硕306求调剂 +9 42838695 2026-03-12 9/450 2026-03-13 10:16 by houyaoxu
[考研] 333求调剂 +3 152697 2026-03-12 4/200 2026-03-13 07:08 by Iveryant
[考研] 085600 材料与化工 295 求调剂 +10 dream…… 2026-03-10 12/600 2026-03-12 13:46 by dream……
[考研] 调剂 +5 呵唔哦豁 2026-03-10 5/250 2026-03-10 22:00 by 28375m
[考博] 26申博求助 +3 跳跃饼干 2026-03-10 4/200 2026-03-10 21:15 by Tntcnn
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭