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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】AFLP求助，选扩始终不能扩出条带，有图
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swul_benben

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】AFLP求助，选扩始终不能扩出条带，有图 已有9人参与

选扩到聚丙烯上始终没有带，附上图，包括预扩检验（琼脂糖，聚丙烯），选扩检验（琼脂糖，聚丙烯）。图依次是预扩琼脂糖，预扩聚丙烯，选扩琼脂糖，选扩聚丙烯。求高人帮助啊。。。。








[ Last edited by swul_benben on 2010-12-10 at 12:38 ]
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1楼 2010-12-10 12:36:15
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

green1223

木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我们遇到的这种情况  最后确定是引物的问题
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10楼2011-01-16 20:29:42
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普通回帖

swul_benben

新虫 (初入文坛)
有没有人能帮帮忙啊，有了解的人么？？
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2楼2010-12-10 15:25:17
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swul_benben

新虫 (初入文坛)
哎。难道没有人知道的么。。。。。
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3楼2010-12-10 15:28:33
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changes

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
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amisking(金币+2):鼓励交流！ 2010-12-10 20:40:38
这个问题可能因素多一些。
1. 预扩、选扩的琼脂糖上样是几微升？
2. 预扩是酶连产物直接扩增的吗？加了几微升为模板。
3. 选扩时用的预扩产物稀释了多少倍？感觉你的预扩产物挺亮的，但是不知道上述1.2的用量，因此不好估计。
4. 你跑的变性胶浓度是多大的？胶的厚度和长度是多少？因为看起来挺厚的。我以前用的是六一厂的垂直板，长板跑过。
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4楼2010-12-10 20:14:16
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swul_benben

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by changes at 2010-12-10 20:14:16:
这个问题可能因素多一些。
1. 预扩、选扩的琼脂糖上样是几微升？
2. 预扩是酶连产物直接扩增的吗？加了几微升为模板。
3. 选扩时用的预扩产物稀释了多少倍？感觉你的预扩产物挺亮的，但是不知道上述1.2的用量， ...

多谢回复
1.预扩和选扩上样都是5微升。
2.是T4连接产物直接扩增的，25微升体系加了3微升为模板
3.选扩时稀释从200倍到20倍不等，都几乎没有带，但是选扩产物点到琼脂糖上居然2000以上很亮，见图，很是奇怪啊。。
4.我跑的是非变性胶，准备有带以后再上变性胶，是一毫米的板。

[ Last edited by swul_benben on 2010-12-11 at 11:06 ]
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5楼2010-12-11 10:32:30
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swul_benben

新虫 (初入文坛)
大家都来说说到底是啥问题啊，难道是选扩引物的问题。。
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6楼2010-12-11 11:07:43
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yujiaping1

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
建议你将预扩也做个模板梯度
甚至酶切连接也要做模板梯度
另外注意预扩增和选扩增的两个引物用量是有比例的，多位点酶切引物分别是稀有位点酶切引物的10倍、6倍，接头也是10倍的比例
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7楼2010-12-11 11:18:52
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huizipinggon

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by swul_benben at 2010-12-10 12:36:15:
选扩到聚丙烯上始终没有带，附上图，包括预扩检验（琼脂糖，聚丙烯），选扩检验（琼脂糖，聚丙烯）。图依次是预扩琼脂糖，预扩聚丙烯，选扩琼脂糖，选扩聚丙烯。求高人帮助啊。。。。



[img]http://pic.emu ...

酶切连接一起做的么？
我做的预扩和选扩跟你的“选扩琼脂糖”的图一样，弥散，不知道怎么回事。是不是不用试剂盒的话，得分步切啊？
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走自己的路，让别人去说吧
8楼2011-01-05 13:55:09
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cond

银虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我最近做cDNA --AFLP和你遇到同样的问题，你解决吗
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9楼2011-01-16 20:19:39
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