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wskxbxf

新虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 58.5
帖子: 71
在线: 9.2小时
虫号: 1413911
注册: 2011-09-23
专业: 植物遗传学

[交流] AFLP酶切连接求高人指点啊已有5人参与

最近做AFLP酶切连接的条件摸索，我用的是植物材料 DNA提取的结果OD260/280都在1.8左右，双酶切用的NEB的EcoRI 和Mse I，酶切分别做了1-6h的梯度，DNA加了400ng左右，没有做DNA的梯度，用的酶切体系是20微升的，但是酶切结果跑电泳之后，隐隐约约能看到弥散，这几个时间没什么区别，上样量已经用了10微升，但还是看不出来什么，试着做了一下连接，之后做的PCR，结果如果，不知道酶切的问题究竟该怎么解决，连接产物跑电泳也很不理想，如图，请高人指导啊

PCR结果

酶切连接结果电泳图

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1楼2011-11-29 20:09:10

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yueyangyy85

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 3.5
帖子: 4
在线: 57分钟
虫号: 1207459
注册: 2011-02-20

★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+4): 鼓励交流！欢迎常来！ 2011-12-21 18:59:50

不知道你的问题解决了么，植物基因组本身含的次生代谢产物比较多，一般酶切的时间两小时左右，时间太长效果也效果不明显，弥散的还是可以的。选择性扩增时，引物退火温度要适当低些，不然引物二聚体会比较明显！

赞一下(2人)

10楼2011-12-21 11:59:15

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