24小时热门版块排行榜    

查看: 2410  |  回复: 11
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

wskxbxf

新虫 (小有名气)

[交流] AFLP酶切连接 求高人指点啊 已有5人参与

最近做AFLP酶切连接的条件摸索,我用的是植物材料 DNA提取的结果OD260/280都在1.8左右,双酶切用的NEB的EcoRI 和Mse I,酶切分别做了1-6h的梯度,DNA加了400ng左右,没有做DNA的梯度,用的酶切体系是20微升的,但是酶切结果 跑电泳之后,隐隐约约能看到弥散,这几个时间没什么区别,上样量已经用了10微升,但还是看不出来什么,试着做了一下连接,之后做的PCR,结果如果,不知道酶切的问题究竟该怎么解决,连接产物跑电泳也很不理想,如图,请高人指导啊

PCR结果



酶切连接结果电泳图
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yueyangyy85

新虫 (初入文坛)

★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
西瓜(金币+4): 鼓励交流!欢迎常来! 2011-12-21 18:59:50
不知道你的问题解决了么,植物基因组本身含的次生代谢产物比较多,一般酶切的时间两小时左右,时间太长效果也效果不明显,弥散的还是可以的。选择性扩增时,引物退火温度要适当低些,不然引物二聚体会比较明显!
10楼2011-12-21 11:59:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

wskxbxf

新虫 (小有名气)

引用回帖:
1楼: Originally posted by wskxbxf at 2011-11-29 20:09:10:
最近做AFLP酶切连接的条件摸索,我用的是植物材料 DNA提取的结果OD260/280都在1.8左右,双酶切用的NEB的EcoRI 和Mse I,酶切分别做了1-6h的梯度,DNA加了400ng左右,没有做DNA的梯度,用的酶切体系是20微升的,但 ...

没有高人指点 哎
2楼2011-11-30 10:14:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

7788945

银虫 (小有名气)

非高人想指点,但是。。
3楼2011-11-30 11:05:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

schkk

至尊木虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
PCR图是预扩增还是选择性扩增的结果啊?这个实验最后需要用大板的PAGE的测序胶作电泳的,琼脂糖分辩率不够,跑的效果基本也就这样了
4楼2011-12-05 19:34:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[博后之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 DpSrDtM079iu 2026-08-22 5/250 2026-08-23 04:07 by OEbVnUOu01ol
[论文投稿] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 4/200 2026-08-23 04:04 by OEbVnUOu01ol
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 7/350 2026-08-23 03:55 by OEbVnUOu01ol
[硕博家园] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-22 7/350 2026-08-23 03:43 by OEbVnUOu01ol
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 2JOx3r2CYEgw 2026-08-21 9/450 2026-08-23 03:31 by OEbVnUOu01ol
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 QTy3jDtz1uLt 2026-08-21 9/450 2026-08-23 03:04 by OEbVnUOu01ol
[考博] 售SCI文章,我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 DpSrDtM079iu 2026-08-22 3/150 2026-08-23 00:55 by OEbVnUOu01ol
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +7 且听虎啸 2026-08-17 8/400 2026-08-22 21:55 by 医学老男孩
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办? +3 简单化xn 2026-08-22 7/350 2026-08-22 19:46 by 简单化xn
[基金申请] 什么时候开奖? +7 CrisMessi 2026-08-18 8/400 2026-08-22 18:29 by 淀粉搬运工
[教师之家] 售一区SCI文章T0P,我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 2JOx3r2CYEgw 2026-08-21 4/200 2026-08-22 16:52 by sunzitan
[基金申请] 今天基金会出结果吗?20260819 +16 kkkl_v 2026-08-19 17/850 2026-08-22 16:12 by 阿布Abu
[基金申请] 时间戳今天,20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 今日不放榜?网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +16 医学老男孩 2026-08-20 20/1000 2026-08-21 21:13 by Ldrop2023
[基金申请] 看来今天不会放榜了? +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧? +4 哈哈蛤? 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +9 yuleib84 2026-08-19 11/550 2026-08-21 10:06 by gltch
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 估计是周四 +3 archvillain 2026-08-18 3/150 2026-08-21 01:48 by jnhyjjm
[基金申请] 重要消息,中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
信息提示
请填处理意见