应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 小片段PCR的问题
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 1629  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

tongyingjia

新虫 (初入文坛)

[求助] 小片段PCR的问题 已有3人参与

我的基因片段长度为324bp，变性温度 94度，30s
                                             退火温度48~58每隔一度设置梯度PCR，30S
                                              延伸温度72度，45s
                                             30个循环
但是PCR结束，跑胶的时候只看到载体的条带，所需要的基因一点都没有p出来，这是为什么呀？求大神解答！！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-03-12 19:57:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Lau_Kimura

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
tongyingjia(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-03-12 21:26:55
tongyingjia: 金币+4, ★有帮助 2014-03-17 20:06:42
（1）载体构建，除了电击转化效率偏低以外，暂时无出现楼主的案例；

（2）最直接的建议：既然PCR效果不理想，换一种验证思路：酶切验证。
赞一下 回复此楼
4楼2014-03-12 21:24:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
tongyingjia(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-03-12 21:25:58
tongyingjia: 金币+7, ★有帮助 2014-03-17 20:06:19
只看到载体的条带？是不是模板加的太多了？

退火温度与用的酶有关，KOD是68，TAQ是72。
赞一下 回复此楼
2楼2014-03-12 20:52:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
tongyingjia: 金币+7, ★有帮助 2014-03-17 20:06:35
模板太多了，再一个你设置的梯度最多到58度有点低吧，我们一般是到65度。
赞一下 回复此楼
hehe
3楼2014-03-12 21:21:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tongyingjia

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-03-12 20:52:26
只看到载体的条带？是不是模板加的太多了？

退火温度与用的酶有关，KOD是68，TAQ是72。

我把模版稀释20倍和稀释200倍都p出来了，但是有很多杂条带，这是怎么回事啊，我的引物都20几bp的，不能再长了吧
赞一下 回复此楼
5楼2014-03-14 19:24:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 274求调剂求调剂 +8 Jachenbingoo 2026-04-06 11/550 2026-04-08 12:07 by wingLLL
[考研] 材料调剂 +11 一样YWY 2026-04-06 11/550 2026-04-08 11:26 by Evan_Liu
[考研] 材料调剂 +19 一样YWY 2026-04-02 20/1000 2026-04-08 11:02 by 不吃魚的貓
[考研] 085602调剂 初试总分335 +3 19123253302 2026-04-06 3/150 2026-04-07 18:00 by jp9609
[论文投稿] Decision: Revise for Editor还会送审吗 100+3 CccccccccFD 2026-04-04 5/250 2026-04-07 10:58 by 北京莱茵润色
[考研] 285求调剂 +5 mapmath 2026-04-06 6/300 2026-04-06 17:18 by 蓝云思雨
[考研] 一志愿安徽某211 0703化学总分339求调剂 +7 晚风不晚 2026-04-04 7/350 2026-04-06 14:06 by houyaoxu
[考研] 301求调剂 +3 XYPLR 2026-04-05 4/200 2026-04-05 19:07 by XYPLR
[考研] 326求调剂 +3 顾若浮生 2026-04-05 3/150 2026-04-05 18:32 by 蓝云思雨
[考研] 298分 070300求调剂 +15 zwen03 2026-04-02 15/750 2026-04-05 12:52 by Hdyxbekcb
[考研] 一志愿江南大学085501机械工程专硕326分，本科佳木斯大学 +5 顾若浮生 2026-04-03 9/450 2026-04-05 09:57 by 1753564080
[考研] 344材料与化工调剂 +9 调剂上岸玘 2026-04-03 9/450 2026-04-04 23:10 by happyddm
[考研] 342求调剂 +3 Liang7111 2026-04-04 5/250 2026-04-04 19:47 by dongzh2009
[考研] 一志愿0817化学工程与技术，求调剂 +24 我不是只因 2026-04-02 28/1400 2026-04-04 15:15 by dongzh2009
[考研] 26调剂 086003 +6 失活的细胞 2026-04-04 6/300 2026-04-04 09:50 by zhangdingwa
[考研] 283分材料与化工求调剂 +29 罗KAKA 2026-04-02 29/1450 2026-04-03 23:56 by userper
[考研] 279求调剂 +6 qazplm0852 2026-04-02 6/300 2026-04-03 10:03 by 蓝云思雨
[考研] 专硕 351 086100 也是考的材科基 本科也是材料 +8 202451007219 2026-04-02 8/400 2026-04-03 09:50 by 蓝云思雨
[考博] 申博求助 +3 Reee1Llll 2026-04-01 3/150 2026-04-02 22:29 by 这是一个无聊的�
[考研] 材料求调剂 +10 呢呢妮妮 2026-04-01 13/650 2026-04-02 09:17 by olim
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭