应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 小片段PCR的问题
41/1返回列表
查看: 1477  |  回复: 8
查看全部回帖@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

tongyingjia

新虫 (初入文坛)

[求助] 小片段PCR的问题已有3人参与

我的基因片段长度为324bp，变性温度 94度，30s
                                             退火温度48~58每隔一度设置梯度PCR，30S
                                              延伸温度72度，45s
                                             30个循环
但是PCR结束，跑胶的时候只看到载体的条带，所需要的基因一点都没有p出来，这是为什么呀？求大神解答！！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼2014-03-12 19:57:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
tongyingjia(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-03-12 21:25:58
tongyingjia: 金币+7, ★有帮助 2014-03-17 20:06:19
只看到载体的条带？是不是模板加的太多了？

退火温度与用的酶有关，KOD是68，TAQ是72。
赞一下 回复此楼
2楼2014-03-12 20:52:26
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by tongyingjia at 2014-03-14 19:24:55
我把模版稀释20倍和稀释200倍都p出来了，但是有很多杂条带，这是怎么回事啊，我的引物都20几bp的，不能再长了吧...

我上面写错了，是延伸温度与用的酶有关，KOD是68，TAQ是72。
如果这样没有目的条带，可能非特异性太强了。
赞一下 回复此楼
7楼2014-03-16 11:40:57
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by tongyingjia at 2014-03-17 20:12:30
有目的条带，但也有很多杂条带。。。切胶的时候得很小心...

恩   纯化以后以这个为模板再扩
赞一下 回复此楼
9楼2014-03-17 20:14:53
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 tongyingjia 的主题更新
41/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭