24小时热门版块排行榜    

查看: 1596  |  回复: 8
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

tongyingjia

新虫 (初入文坛)

[求助] 小片段PCR的问题 已有3人参与

我的基因片段长度为324bp,变性温度 94度,30s
                                             退火温度48~58每隔一度设置梯度PCR,30S
                                              延伸温度72度,45s
                                             30个循环
但是PCR结束,跑胶的时候只看到载体的条带,所需要的基因一点都没有p出来,这是为什么呀?求大神解答!!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
tongyingjia: 金币+7, 有帮助 2014-03-17 20:06:35
模板太多了,再一个你设置的梯度最多到58度有点低吧,我们一般是到65度。
hehe
3楼2014-03-12 21:21:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
tongyingjia(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-03-12 21:25:58
tongyingjia: 金币+7, 有帮助 2014-03-17 20:06:19
只看到载体的条带?是不是模板加的太多了?

退火温度与用的酶有关,KOD是68,TAQ是72。
2楼2014-03-12 20:52:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Lau_Kimura

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
tongyingjia(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-03-12 21:26:55
tongyingjia: 金币+4, 有帮助 2014-03-17 20:06:42
(1)载体构建,除了电击转化效率偏低以外,暂时无出现楼主的案例;

(2)最直接的建议:既然PCR效果不理想,换一种验证思路:酶切验证。
4楼2014-03-12 21:24:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tongyingjia

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-03-12 20:52:26
只看到载体的条带?是不是模板加的太多了?

退火温度与用的酶有关,KOD是68,TAQ是72。

我把模版稀释20倍和稀释200倍都p出来了,但是有很多杂条带,这是怎么回事啊,我的引物都20几bp的,不能再长了吧
5楼2014-03-14 19:24:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 318求调剂 +5 李新光 2026-03-10 5/250 2026-03-17 11:02 by JineShine
[考研] 一志愿苏州大学材料工程(085601)专硕有科研经历三项国奖两个实用型专利一项省级立项 +5 大火山小火山 2026-03-16 7/350 2026-03-17 10:26 by peike
[考研] 268求调剂 +6 一定有学上- 2026-03-14 7/350 2026-03-17 10:14 by Sammy2
[论文投稿] 有没有大佬发小论文能带我个二作 +3 增锐漏人 2026-03-17 4/200 2026-03-17 09:26 by xs74101122
[考研] 11408 一志愿西电,277分求调剂 +3 zhouzhen654 2026-03-16 3/150 2026-03-17 07:03 by laoshidan
[考研] 材料专硕326求调剂 +5 墨煜姒莘 2026-03-15 5/250 2026-03-16 21:30 by 木瓜膏
[基金申请] 国自科面上基金字体 +6 iwuli 2026-03-12 7/350 2026-03-16 21:18 by sculhf
[考研] 328求调剂,英语六级551,有科研经历 +3 生物工程调剂 2026-03-16 4/200 2026-03-16 20:13 by Wangjingyue
[考研] 0854控制工程 359求调剂 可跨专业 +3 626776879 2026-03-14 9/450 2026-03-16 17:42 by 626776879
[考研] 304求调剂 +3 曼殊2266 2026-03-14 3/150 2026-03-16 16:39 by houyaoxu
[考研] 0703化学调剂,求各位老师收留 +8 秋有木北 2026-03-14 8/400 2026-03-16 15:21 by 哦哦123
[考研] 341求调剂 +4 番茄头--- 2026-03-10 4/200 2026-03-13 23:12 by JourneyLucky
[考研] 材料与化工085600调剂求老师收留 +9 jiaanl 2026-03-11 9/450 2026-03-13 20:22 by JourneyLucky
[考研] 考研调剂 +4 芬达46 2026-03-12 4/200 2026-03-13 16:04 by ruiyingmiao
[考研] 工科材料085601 279求调剂 +8 困于星晨 2026-03-12 10/500 2026-03-13 15:42 by ms629
[考研] 工科调剂 +4 Jiang191123! 2026-03-11 4/200 2026-03-13 15:15 by Miko19
[考研] 085600材料与化工 309分请求调剂 +7 dtdxzxx 2026-03-12 8/400 2026-03-13 14:43 by jxchenghu
[考研] 0856化工原理 +6 z2839474511 2026-03-10 6/300 2026-03-13 10:41 by houyaoxu
[考研] 085600 材料与化工 295 求调剂 +10 dream…… 2026-03-10 12/600 2026-03-12 13:46 by dream……
[考研] 大连大学化学专业研究生调剂 +3 琪久. 2026-03-10 8/400 2026-03-11 10:02 by 琪久.
信息提示
请填处理意见