应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 关于PCR反应液纯化回收后再电泳的问题
51/1返回列表
查看: 2152  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

音四1990

铁虫 (小有名气)

[求助] 关于PCR反应液纯化回收后再电泳的问题 已有2人参与

如题 我跑RACE 每一次PCR的反应液用TAKARA miniBEST 的纯化Kit回收
回收之后的溶液和后续的巢式PCR产物一起跑电泳 这样才能对比结果
可是每次在加样的时候就发现 回收产物取5ul与1ul 6X Loading Buffer混合后加样 混合液沉降不下去 会随着枪头的拔出被提到加样孔外面 然后很快就扩散到TAE里面消失掉了
因为之前没做过回收产物的电泳 不知道问题出在哪里 是要用别的BUFFER呢还是溶液需要稀释？
有的能沉降下去有的不能……
各路大神快来救命吧……

因为小生只有6个金币……所以只能付出全副身家了！大神们 救人一命胜造七级浮屠啊！！
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

虫友问答-分子生物

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
我没那种命啊轮也不会轮到我
1楼 2014-03-09 09:38:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

音四1990

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 西门吹雪170 at 2014-03-09 13:04:03
呃，我没这么做过，着实有点不清楚，问问楼下的高手...

OK！多谢大神！！！
回复此楼
我没那种命啊轮也不会轮到我
7楼2014-03-09 16:22:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流！ 2014-03-31 16:20:45
1、注意自己点样的方法，一般不会漂出去的，或者你可以再多加点Loading Buffer，也许你切胶回收后不是用灭菌水溶解样品也有影响
2、切胶回收的产物一般需要加大点样量，5uL一般看不出什么结果吧？你可以增加PCR体系的量，拿这个剩下的产物进行比较
赞一下 回复此楼
植根于内心的修养；无需提醒的自觉；以约束为前提的自由；为别人着想的善良
2楼2014-03-09 10:44:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

音四1990

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 西门吹雪170 at 2014-03-09 10:44:30
1、注意自己点样的方法，一般不会漂出去的，或者你可以再多加点Loading Buffer，也许你切胶回收后不是用灭菌水溶解样品也有影响
2、切胶回收的产物一般需要加大点样量，5uL一般看不出什么结果吧？你可以增加PCR体系 ...

不是切胶回收 是直接纯化PCR反应液 洗脱用的是试剂盒里的Elution Buffer 会不会是因为这个的原因……
之前一次纯化用的灭菌水 但上样是还是不对
加到孔里之后总要逸散掉一部分 跑出来的也是歪歪扭扭的
赞一下 回复此楼
我没那种命啊轮也不会轮到我
3楼2014-03-09 11:55:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

XOooZzz

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
音四1990: 金币+6, ★★★★★最佳答案, 仔细回想我好像在洗脱之前没有再离心一次……下次在试试 2014-03-09 16:23:35
样品上浮九成因为里面混有乙醇。
先检查你的试剂有无问题：分别用Elution Buffer 和灭菌水 加Loading Buffer后点样，看是否快速下沉。
经上步确认后，真相只能是你回收时没有清除干净乙醇。
赞一下 回复此楼
4楼2014-03-09 12:20:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 国社科又开始会评了，不知道这次命运如何 +5 雨打竹帘 2026-08-30 9/450 2026-08-30 22:23 by 余韵清
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 4FFAWE8HcgUD 2026-08-29 4/200 2026-08-30 20:30 by hZiFeudZyoGR
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +5 jCd0dEvKHShX 2026-08-29 7/350 2026-08-30 19:45 by hZiFeudZyoGR
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 jCd0dEvKHShX 2026-08-29 4/200 2026-08-30 19:35 by hZiFeudZyoGR
[硕博家园] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 jCd0dEvKHShX 2026-08-29 5/250 2026-08-30 19:35 by hZiFeudZyoGR
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 5/250 2026-08-30 19:01 by hZiFeudZyoGR
[博后之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +7 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 8/400 2026-08-30 18:07 by hZiFeudZyoGR
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 7/350 2026-08-30 17:45 by hZiFeudZyoGR
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +6 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 7/350 2026-08-30 17:03 by hZiFeudZyoGR
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +7 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 14/700 2026-08-30 17:01 by hZiFeudZyoGR
[找工作] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 8/400 2026-08-30 12:14 by l0VvVHGBGRLv
[基金申请] 29号明天会评吗 +3 笨笨唐 2026-08-28 3/150 2026-08-30 09:29 by cww8181
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 4/200 2026-08-30 06:57 by ZPa0EcMwuECS
[教师之家] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 8/400 2026-08-30 05:48 by ZPa0EcMwuECS
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高，自己申请怎么就这么难 +12 Kittylucky 2026-08-27 13/650 2026-08-29 00:04 by superceng
[基金申请] 基金不中，共勉 +11 eulota 2026-08-26 11/550 2026-08-28 14:22 by 火星超人xi
[基金申请] 基金未中，这种答复是模板吗？ +5 zhaosm1982 2026-08-27 6/300 2026-08-27 16:00 by lfy8008
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +23 koalala 2026-08-24 26/1300 2026-08-26 14:29 by 宝贝虫子
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候，我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
[基金申请] 某些机构，以效率低为荣，以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭