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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 重组质粒双酶切后没有条带
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wxl.1989822

金虫 (小有名气)

[求助] 重组质粒双酶切后没有条带 已有2人参与

RT 本人最近做的一个载体构建，重组质粒验证的时候提取质粒双酶切，空质粒和酶切的一起跑胶显示重组质粒大致正确，酶切的泳道没有条带，进行菌液和重组质粒PCR目的基因显示，能P出目的基因？请教这是怎么回事？
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1楼 2014-03-06 20:41:23
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
你这个帖子比较怪，护肤不了。
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2楼2014-03-06 21:22:02
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普通回帖

鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
我回复了2次，都没有成功，白写了那么多。
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3楼2014-03-06 21:22:41
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-03-06 21:22:02
你这个帖子比较怪，护肤不了。

护肤？
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植根于内心的修养；无需提醒的自觉；以约束为前提的自由；为别人着想的善良
4楼2014-03-06 21:31:42
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 西门吹雪170 at 2014-03-06 21:31:42
护肤？...

回复。   刚刚回了一次，抽了，点了发表却没发表出来。 第二次也这样子。
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5楼2014-03-06 21:40:15
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wxl.1989822: 金币+5, ★有帮助 2014-03-06 22:05:02
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-03-07 18:37:50
wxl.1989822: 金币+5, ★有帮助 2014-03-08 13:46:26
这也是经常遇到的问题，重组质粒大小正确，进行PCR验证也有出现目的条带，但是就是酶切不出条带，建议你测一下重组质粒的浓度，然后按最终反应体系质粒的浓度约为20ug/uL进行计算所需加样的量，试试看吧，一般这样是可以切出来的，37℃ 2.5h
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植根于内心的修养；无需提醒的自觉；以约束为前提的自由；为别人着想的善良
6楼2014-03-06 21:42:46
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2014-03-06 21:40:15
回复。   刚刚回了一次，抽了，点了发表却没发表出来。 第二次也这样子。...

可能你那的网速有问题哦
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植根于内心的修养；无需提醒的自觉；以约束为前提的自由；为别人着想的善良
7楼2014-03-06 21:52:33
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wxl.1989822: 金币+5, ★有帮助 2014-03-08 13:43:53
wxl.1989822: 金币+5 2014-03-08 13:46:03
酶切质粒浓度不要太高。你可以测个序验证一下你的重组质粒的酶切位点对否。
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hehe
8楼2014-03-06 22:02:09
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wxl.1989822

金虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by lvbobo823 at 2014-03-06 22:02:09
酶切质粒浓度不要太高。你可以测个序验证一下你的重组质粒的酶切位点对否。

构建成了 酶切位点估计没有问题
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9楼2014-03-06 22:04:23
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 西门吹雪170 at 2014-03-06 21:52:33
可能你那的网速有问题哦...

恩   我也觉得是
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10楼2014-03-07 08:57:16
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