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馨-馨

银虫 (小有名气)

[求助] 提质粒。。。 已有2人参与

本人要从DH5α菌中提取质粒,对养菌的时间有什么要求吗?需要测OD为0.6吗??、
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zhaozhibozhi

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
馨-馨: 金币+5, ★★★很有帮助 2014-03-05 22:25:55
一般不要超过对数期吧。我们通常挑取单菌落,37°、180rpm,16-24h。效果是可以的
做一个阳光、开朗的小和尚
2楼2014-03-05 09:00:56
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reallpf

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
dllchina: 金币+5, good 2014-03-05 11:48:38
先耐心回答你的问题。
大肠一般培养过夜,第二天早上来就可以提质粒了;如果加了抗生素,可稍延长。我的经验一般37度,250 rpm,培养8 h ~ 16 h。菌液稀一点没关系,注重提质粒的关键步骤或者多离心处理一点菌液都可以。
质粒提取中哪些步骤可以提高质粒得率,你可以在站内搜索就有很多,我也有过一个帖子详细说明过。

很多基础实验没你想象中的那么难,实验有科技含量,等你真正投身实验室生活的时候,每天就是很基础重复,重复到所有的实验都在你脑海里。到时候就发现以前的陌生感全无,实验室的一切都很自然。
所以既然进入实验室,就从实践做起,等发现问题了再分析解决,要的只是坚持!

另外亲,有些问题可以现在小木虫里搜索下看看有没有啊,群主你说呢?@dllchina。
之前“冼亮淀粉酶”有一个帖子我觉得说的挺对的,大概是说有些人平时不来,有问题来问了就走,很多还是别人已经问过的。这种问题你让经常逛小木虫的虫友汇集多少耐心来重复回答呢?

个人见解,可以忽略。冒犯之处还请见谅。
3楼2014-03-05 10:28:07
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馨-馨

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by zhaozhibozhi at 2014-03-05 09:00:56
一般不要超过对数期吧。我们通常挑取单菌落,37°、180rpm,16-24h。效果是可以的

我用5ml的支管,37℃,200rpm,过夜,OD值都达到1.6了,这样的菌会不会有点老了??
4楼2014-03-05 22:29:02
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zhaozhibozhi

金虫 (正式写手)

这大概是对数后期了,提质粒是没问题的。我们通常都是接近这个程度。
做一个阳光、开朗的小和尚
5楼2014-03-06 08:18:59
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