应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于质粒pCAMBIA1301的验证
51/1返回列表
查看: 2139  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

rollandyoung

金虫 (小有名气)

[求助] 关于质粒pCAMBIA1301的验证

别人送了我一个pCAMBIA1301的质粒，不知道如何验证其可用性。
一、我做了如下工作：
1. 将带有该质粒的大肠杆菌菌液划线于LB平板上，平板上含有50ug/ml的潮霉素（此质粒具有抗潮霉素的基因）
2. 37℃培养16小时，结果每个平板上只有2-3个菌落出现。
二、问题：
1. 请问这是正常的吗？
2.菌落数量稀少是否与我加入的潮霉素含量过高有关？
3. 为了鉴定此质粒的可用性，我还需要做哪些工作？
此质粒是开展实验的基础，且以前从未接触过此类试验，顾求知欲望急切，请各位高手不吝赐教，先行谢过大家！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-07-26 10:46:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

changes

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
rollandyoung(金币+2): 非常感谢你的帮助，很详细！祝你试验顺利！ 2011-07-26 12:18:55
dhd997(金币+2): 鼓励一下 2011-07-26 12:59:09
引用回帖:
Originally posted by rollandyoung at 2011-07-26 10:46:32:
别人送了我一个pCAMBIA1301的质粒，不知道如何验证其可用性。
一、我做了如下工作：
1. 将带有该质粒的大肠杆菌菌液划线于LB平板上，平板上含有50ug/ml的潮霉素（此质粒具有抗潮霉素的基因）
2. 37℃培养16小时 ...

1. 可以根据pCAMBIA1301的图谱进行酶切验证，如利用XhoI酶切则把潮霉素基因切下来获得对应的片段，
2. 利用35S启动子等设计引物测序，这个质粒应该是11837bp，序列也都公布了，直接比对就可以了。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-07-26 11:14:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

changes

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by rollandyoung at 2011-07-26 10:46:32:
别人送了我一个pCAMBIA1301的质粒，不知道如何验证其可用性。
一、我做了如下工作：
1. 将带有该质粒的大肠杆菌菌液划线于LB平板上，平板上含有50ug/ml的潮霉素（此质粒具有抗潮霉素的基因）
2. 37℃培养16小时 ...

对了，这个质粒具有卡那抗性，在构建载体时我们一般在培养基里加入卡纳抗生素，挑取单克隆，摇菌然后利用潮霉素引物扩增验证。
赞一下 回复此楼
3楼2011-07-26 11:16:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
★ ★ ★
amisking(金币+3): 鼓励应助 2011-07-26 20:29:09
1：可以进行测序的；
2：将带有该质粒的大肠杆菌划线到平板上，提质粒，然后根据该载体上图谱进行双酶切或者单酶切进行验证；这个方法比较保险；
其实要检验此载体的可用性，即便在该抗生素的板子上生长也不能说明什么问题；看你要做什么实验了，如果可以达到预期的目的那么就可用；
赞一下(1人) 回复此楼
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
4楼2011-07-26 14:25:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

czfscf

金虫 (正式写手)
楼主你好，我想做个农杆菌介导真菌，想问您要这个pCAMBIA1301质粒，求赠送或者交换，邮费我这边付。购买也行！万分感激，读个研不易啊
赞一下 回复此楼
Ecological Genomics；the scientific walking hormone
5楼2013-05-03 14:17:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 rollandyoung 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[找工作] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 8/400 2026-09-06 17:49 by eObJPa4gWmp6
[文学芳草园] 两块石头 +7 阿美_Lml888 2026-09-03 9/450 2026-09-06 17:48 by myrtle
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 6/300 2026-09-06 17:21 by eObJPa4gWmp6
[教师之家] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 9/450 2026-09-06 17:09 by eObJPa4gWmp6
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-04 8/400 2026-09-06 17:09 by eObJPa4gWmp6
[博后之家] 广西大学-广州大学招聘博士后 欢迎广大优秀人才！！！ +5 SCSIOyxguo 2026-09-03 8/400 2026-09-06 15:06 by 可爱小花朵
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 j5mmowWXNWxv 2026-09-05 3/150 2026-09-06 13:09 by eObJPa4gWmp6
[基金申请] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 j5mmowWXNWxv 2026-09-05 3/150 2026-09-06 12:49 by eObJPa4gWmp6
[考博] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 j5mmowWXNWxv 2026-09-05 4/200 2026-09-06 12:29 by eObJPa4gWmp6
[基金申请] 科研人应该花精力去思考如何解决问题，而不是去凝练问题 +10 瞬息宇宙 2026-09-01 19/950 2026-09-06 11:15 by jiangxuan2004
[论文投稿] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-04 8/400 2026-09-06 11:00 by eObJPa4gWmp6
[考研] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 4/200 2026-09-06 07:20 by E1iiBLMU2XnD
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +6 7ZYIEW2YWn72 2026-09-04 9/450 2026-09-06 06:00 by E1iiBLMU2XnD
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +8 CRJ0Aq2FtVH0 2026-09-03 15/750 2026-09-06 05:48 by E1iiBLMU2XnD
[硕博家园] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 5/250 2026-09-06 02:39 by E1iiBLMU2XnD
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 jPDp0sc2B7zQ 2026-09-05 5/250 2026-09-06 02:19 by E1iiBLMU2XnD
[基金申请] 面上没中，邀请各位路过的虫友分析一下分数 +12 jackleilei 2026-09-03 13/650 2026-09-05 18:10 by fireguard
[硕博家园] Ei源刊怎么投 +4 Fengshun9711 2026-09-04 4/200 2026-09-04 19:30 by 研途知予
[硕博家园] 哈尔滨工业大学韩晓军教授课题组招收2027年硕士推免生及博士研究生 +3 灯灯灯灯DDDD 2026-09-03 3/150 2026-09-03 21:22 by 科研皮皮猪
[基金申请] 要骂人了，新模版改版就是要淡化问题凝练这种虚的东西，结果有个评委还在说凝练得不够 +9 瞬息宇宙 2026-08-31 17/850 2026-09-02 14:04 by anjeeshine
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭