应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 试剂盒中提质粒，浓度很小
91/1返回列表
查看: 2550  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

简单执着

新虫 (初入文坛)

[求助] 试剂盒中提质粒，浓度很小

最近用试剂盒中提了好几次质粒，发现质粒浓度都是超级小，原因是什么呢？各路大神能否指点一二。。。谢过~
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-04-24 13:08:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张宏宇123

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 欢迎交流 2012-04-24 13:51:36
你菌浓怎么样？高不高？
加完裂解液是不是充分裂解？
再就是你用的凝胶加的染色剂是不是够量，不够的话带回很暗，我以前就遇到过。
赞一下 回复此楼
未来不是梦
2楼2012-04-24 13:39:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你把质粒跑胶看一下，看带大小对不对。尽量按试剂盒的要求步骤做。不行的话换个新试剂盒试试。
赞一下 回复此楼
hehe
3楼2012-04-24 14:16:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

简单执着

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 张宏宇123 at 2012-04-24 13:39:51:
你菌浓怎么样？高不高？
加完裂解液是不是充分裂解？
再就是你用的凝胶加的染色剂是不是够量，不够的话带回很暗，我以前就遇到过。

菌浓度不是很多，分装离心的时候都没有闻到那个臭臭的味道~可能是这个原因吧，明天多摇一会试试~谢谢你哦~
赞一下 回复此楼
4楼2012-04-24 14:41:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

简单执着

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by lvbobo823 at 2012-04-24 14:16:47:
你把质粒跑胶看一下，看带大小对不对。尽量按试剂盒的要求步骤做。不行的话换个新试剂盒试试。

今天可是按试剂盒认认真真做了一遍，可能是菌量太少吧。。。谢啦~
赞一下 回复此楼
5楼2012-04-24 14:43:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chlorella409

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用培养过夜的细菌，取1-5ml就可以啦
赞一下 回复此楼
6楼2012-04-24 14:47:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

mamadexiao

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 恩，鼓励提供有价值的应助哦 2012-04-25 13:36:10
首先，你的宿主菌是不是很好扩增你的质粒的那种宿主菌
其次，你如果做，建议对菌液的吸光度测个OD值，虽然我们都是按照经验，至少，你要保证你的菌液是浑浊的吧。。。清亮的你怎么提质粒，菌都没有。。。
再次，你做的时候，最后一步不是要洗脱你的质粒么，你可以适当少加些EB缓冲液或者超纯水，因为浓度大了，你还可以加水稀释，但是稀了莫非你要低温抽真空干燥？！呵呵
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2012-04-24 20:42:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

简单执着

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by mamadexiao at 2012-04-24 20:42:07:
首先，你的宿主菌是不是很好扩增你的质粒的那种宿主菌
其次，你如果做，建议对菌液的吸光度测个OD值，虽然我们都是按照经验，至少，你要保证你的菌液是浑浊的吧。。。清亮的你怎么提质粒，菌都没有。。。
再次， ...

我也是提了好几次师兄才告诉这是低拷贝，偶滴那个神神啊。。。白郁闷了~
赞一下 回复此楼
8楼2012-04-26 14:26:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

___戊_

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-04-27 08:32:58
首先可以过夜摇菌  增加菌液浓度
其次可在最后一步加入EB时少加一些（比如30-40ul）
还有就是可重复操作最后一步 就是把从吸附柱中离心下来的EB 重新加入刚才那个吸附柱再次离心
还有需要注意的就是在刚开始加入EB 时要放置1min使质粒DNA完全溶于EB
赞一下 回复此楼
9楼2012-04-26 17:02:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 简单执着 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭