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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 试剂盒中提质粒，浓度很小
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简单执着

新虫 (初入文坛)

[求助] 试剂盒中提质粒，浓度很小

最近用试剂盒中提了好几次质粒，发现质粒浓度都是超级小，原因是什么呢？各路大神能否指点一二。。。谢过~
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1楼 2012-04-24 13:08:50
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张宏宇123

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 欢迎交流 2012-04-24 13:51:36
你菌浓怎么样？高不高？
加完裂解液是不是充分裂解？
再就是你用的凝胶加的染色剂是不是够量，不够的话带回很暗，我以前就遇到过。
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未来不是梦
2楼2012-04-24 13:39:51
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你把质粒跑胶看一下，看带大小对不对。尽量按试剂盒的要求步骤做。不行的话换个新试剂盒试试。
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hehe
3楼2012-04-24 14:16:47
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简单执着

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 张宏宇123 at 2012-04-24 13:39:51:
你菌浓怎么样？高不高？
加完裂解液是不是充分裂解？
再就是你用的凝胶加的染色剂是不是够量，不够的话带回很暗，我以前就遇到过。

菌浓度不是很多，分装离心的时候都没有闻到那个臭臭的味道~可能是这个原因吧，明天多摇一会试试~谢谢你哦~
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4楼2012-04-24 14:41:43
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简单执着

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by lvbobo823 at 2012-04-24 14:16:47:
你把质粒跑胶看一下，看带大小对不对。尽量按试剂盒的要求步骤做。不行的话换个新试剂盒试试。

今天可是按试剂盒认认真真做了一遍，可能是菌量太少吧。。。谢啦~
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5楼2012-04-24 14:43:03
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chlorella409

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用培养过夜的细菌，取1-5ml就可以啦
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6楼2012-04-24 14:47:12
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mamadexiao

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 恩，鼓励提供有价值的应助哦 2012-04-25 13:36:10
首先，你的宿主菌是不是很好扩增你的质粒的那种宿主菌
其次，你如果做，建议对菌液的吸光度测个OD值，虽然我们都是按照经验，至少，你要保证你的菌液是浑浊的吧。。。清亮的你怎么提质粒，菌都没有。。。
再次，你做的时候，最后一步不是要洗脱你的质粒么，你可以适当少加些EB缓冲液或者超纯水，因为浓度大了，你还可以加水稀释，但是稀了莫非你要低温抽真空干燥？！呵呵
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7楼2012-04-24 20:42:07
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简单执着

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by mamadexiao at 2012-04-24 20:42:07:
首先，你的宿主菌是不是很好扩增你的质粒的那种宿主菌
其次，你如果做，建议对菌液的吸光度测个OD值，虽然我们都是按照经验，至少，你要保证你的菌液是浑浊的吧。。。清亮的你怎么提质粒，菌都没有。。。
再次， ...

我也是提了好几次师兄才告诉这是低拷贝，偶滴那个神神啊。。。白郁闷了~
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8楼2012-04-26 14:26:10
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___戊_

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-04-27 08:32:58
首先可以过夜摇菌  增加菌液浓度
其次可在最后一步加入EB时少加一些（比如30-40ul）
还有就是可重复操作最后一步 就是把从吸附柱中离心下来的EB 重新加入刚才那个吸附柱再次离心
还有需要注意的就是在刚开始加入EB 时要放置1min使质粒DNA完全溶于EB
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9楼2012-04-26 17:02:15
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