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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 碱法提质粒时遇到的问题！
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蝶舞清池

银虫 (初入文坛)

[求助] 碱法提质粒时遇到的问题！

质粒提取 酚氯仿异戊醇抽提后上清浑浊，什么原因？先谢谢大家了！
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1楼 2012-09-09 10:40:46
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心存理工
2楼2012-09-09 10:51:16
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无疆@行者

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+3, 鼓励发帖交流问题。 2012-09-09 18:29:33
蝶舞清池: 金币+10, ★★★很有帮助 2012-09-14 16:20:00
酚氯仿异戊醇抽提是去质粒中蛋白，上清浑浊是不是楼主离心时间短或者转速低，那些浑浊我觉得可能是酚氯仿在水中形成的胶体
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3楼2012-09-09 13:22:53
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wzqno

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可能是菌体有问题，建议增加抗生素的量，或者更换抗生素，我之前有一次提取质粒的时候，离心菌体后沉淀不是以往的白色，而是褐色的，酸碱中和之后产生的也不是絮状白色沉淀而是大量白色颗粒，高速离心后上清也很浑浊，最后只能放弃
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4楼2012-09-10 08:37:14
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yijian0731

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢分享经验 2012-09-12 04:33:06
可能是有杂菌污染，我有次做也是这样，又来重新摇了菌再做就好了，我们实验室现在都用试剂盒提质粒了，曾经有个师兄算过一笔账，用试剂盒提比用碱法提也贵不了多少钱，而且时间上能节约很多，建议楼主用试剂盒吧，质量绝对好啊~~
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5楼2012-09-11 10:55:44
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wenzi6337

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
菌液太多，不能完全裂解，或有杂菌。
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蝶舞清池
6楼2012-09-11 23:33:41
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蝶舞清池

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by yijian0731 at 2012-09-11 10:55:44
可能是有杂菌污染，我有次做也是这样，又来重新摇了菌再做就好了，我们实验室现在都用试剂盒提质粒了，曾经有个师兄算过一笔账，用试剂盒提比用碱法提也贵不了多少钱，而且时间上能节约很多，建议楼主用试剂盒吧，质 ...

哦，还真是杂菌污染了！
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7楼2012-09-14 16:21:16
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蝶舞清池

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by wzqno at 2012-09-10 08:37:14
可能是菌体有问题，建议增加抗生素的量，或者更换抗生素，我之前有一次提取质粒的时候，离心菌体后沉淀不是以往的白色，而是褐色的，酸碱中和之后产生的也不是絮状白色沉淀而是大量白色颗粒，高速离心后上清也很浑浊 ...

加大离心速度和时间后还是出现浑浊，可能不是这个原因！不过，还是谢谢！
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8楼2012-09-14 16:22:36
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蝶舞清池

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by wzqno at 2012-09-10 08:37:14
可能是菌体有问题，建议增加抗生素的量，或者更换抗生素，我之前有一次提取质粒的时候，离心菌体后沉淀不是以往的白色，而是褐色的，酸碱中和之后产生的也不是絮状白色沉淀而是大量白色颗粒，高速离心后上清也很浑浊 ...

哦，抱歉上一天发错了！！
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9楼2012-09-14 16:24:47
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蝶舞清池

银虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by wenzi6337 at 2012-09-11 23:33:41
菌液太多，不能完全裂解，或有杂菌。

哦，谢谢！
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10楼2012-09-14 16:25:43
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