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蝶舞清池

银虫 (初入文坛)

[求助] 碱法提质粒时遇到的问题!

质粒提取 酚氯仿异戊醇抽提后上清浑浊,什么原因?先谢谢大家了!
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蝶舞清池

银虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by wzqno at 2012-09-10 08:37:14
可能是菌体有问题,建议增加抗生素的量,或者更换抗生素,我之前有一次提取质粒的时候,离心菌体后沉淀不是以往的白色,而是褐色的,酸碱中和之后产生的也不是絮状白色沉淀而是大量白色颗粒,高速离心后上清也很浑浊 ...

加大离心速度和时间后还是出现浑浊,可能不是这个原因!不过,还是谢谢!
8楼2012-09-14 16:22:36
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无疆@行者

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+3, 鼓励发帖交流问题。 2012-09-09 18:29:33
蝶舞清池: 金币+10, ★★★很有帮助 2012-09-14 16:20:00
酚氯仿异戊醇抽提是去质粒中蛋白,上清浑浊是不是楼主离心时间短或者转速低,那些浑浊我觉得可能是酚氯仿在水中形成的胶体
3楼2012-09-09 13:22:53
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wzqno

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
可能是菌体有问题,建议增加抗生素的量,或者更换抗生素,我之前有一次提取质粒的时候,离心菌体后沉淀不是以往的白色,而是褐色的,酸碱中和之后产生的也不是絮状白色沉淀而是大量白色颗粒,高速离心后上清也很浑浊,最后只能放弃
4楼2012-09-10 08:37:14
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yijian0731

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢分享经验 2012-09-12 04:33:06
可能是有杂菌污染,我有次做也是这样,又来重新摇了菌再做就好了,我们实验室现在都用试剂盒提质粒了,曾经有个师兄算过一笔账,用试剂盒提比用碱法提也贵不了多少钱,而且时间上能节约很多,建议楼主用试剂盒吧,质量绝对好啊~~
5楼2012-09-11 10:55:44
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