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蝶舞清池

银虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
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虫号: 1109980
注册: 2010-09-28
专业: 微生物药物

[求助] 碱法提质粒时遇到的问题！

质粒提取酚氯仿异戊醇抽提后上清浑浊，什么原因？先谢谢大家了！

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1楼 2012-09-09 10:40:46

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

蝶舞清池

银虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
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虫号: 1109980
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专业: 微生物药物

引用回帖:

5楼: Originally posted by yijian0731 at 2012-09-11 10:55:44
可能是有杂菌污染，我有次做也是这样，又来重新摇了菌再做就好了，我们实验室现在都用试剂盒提质粒了，曾经有个师兄算过一笔账，用试剂盒提比用碱法提也贵不了多少钱，而且时间上能节约很多，建议楼主用试剂盒吧，质 ...

哦，还真是杂菌污染了！

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7楼2012-09-14 16:21:16

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无疆@行者

银虫 (小有名气)

BioEPI: 1
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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+3, 鼓励发帖交流问题。 2012-09-09 18:29:33
蝶舞清池: 金币+10, ★★★很有帮助 2012-09-14 16:20:00

酚氯仿异戊醇抽提是去质粒中蛋白，上清浑浊是不是楼主离心时间短或者转速低，那些浑浊我觉得可能是酚氯仿在水中形成的胶体

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3楼2012-09-09 13:22:53

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wzqno

金虫 (小有名气)

BioEPI: 1
应助: 16 (小学生)
金币: 759
红花: 1
帖子: 225
在线: 69小时
虫号: 906178
注册: 2009-11-18
性别: GG
专业: 疫苗学

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

可能是菌体有问题，建议增加抗生素的量，或者更换抗生素，我之前有一次提取质粒的时候，离心菌体后沉淀不是以往的白色，而是褐色的，酸碱中和之后产生的也不是絮状白色沉淀而是大量白色颗粒，高速离心后上清也很浑浊，最后只能放弃

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4楼2012-09-10 08:37:14

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yijian0731

铜虫 (初入文坛)

应助: 2 (幼儿园)
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性别: GG
专业: 基因组学

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wizardfan: 金币+2, 谢谢分享经验 2012-09-12 04:33:06

可能是有杂菌污染，我有次做也是这样，又来重新摇了菌再做就好了，我们实验室现在都用试剂盒提质粒了，曾经有个师兄算过一笔账，用试剂盒提比用碱法提也贵不了多少钱，而且时间上能节约很多，建议楼主用试剂盒吧，质量绝对好啊~~

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5楼2012-09-11 10:55:44

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