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desheng101

木虫 (正式写手)

[求助] 大提质粒胶回收的问题

大提质粒,上样1ul,浓度我感觉还很高,一直出现小于超螺旋一条2500bp左右的条带,一直百思不得其解,后来上论坛根据自己的实验结果,觉得2500bp是裂解过程中出现的不正常质粒。但是还是想把超螺旋切下来做一个转化,于是第二个问题出现了,切下来的超螺旋胶回收再次电泳,发现出现了3条带。想问问各位下面2个问题
1,2500bp的条带出现的原因是什么
2,超螺旋胶回收3条带出现的原因是什么?是不是质粒的3种形态?

[ Last edited by desheng101 on 2013-7-10 at 17:39 ]
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
desheng101: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-07-11 09:06:02
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-07-11 12:19:57
1. 你的目标质粒是多大的?
2. 关于超螺旋带回收后出现三条带的原因我想应该是这样:超螺旋是质粒的折叠构象,在胶回收过程中造成部分折叠破坏,形成开环和线性构象。
不知道你提出来的质粒超螺旋的比例。一般质量好的超螺旋占很大比例,没有必要从胶上再回收超螺旋质粒。
2楼2013-07-11 07:31:43
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longrna

新虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-11 07:31:43
1. 你的目标质粒是多大的?
2. 关于超螺旋带回收后出现三条带的原因我想应该是这样:超螺旋是质粒的折叠构象,在胶回收过程中造成部分折叠破坏,形成开环和线性构象。
不知道你提出来的质粒超螺旋的比例。一般质量 ...

同意二楼
伟大航线....
3楼2013-07-11 08:52:10
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desheng101

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-11 07:31:43
1. 你的目标质粒是多大的?
2. 关于超螺旋带回收后出现三条带的原因我想应该是这样:超螺旋是质粒的折叠构象,在胶回收过程中造成部分折叠破坏,形成开环和线性构象。
不知道你提出来的质粒超螺旋的比例。一般质量 ...

感谢您的回答,我们是大提的,所以超螺旋还很很多,就是出现比超螺旋还小的一条2500bp的带,所以我们回收,准备做一个转化。
4楼2013-07-11 09:05:35
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longrna

新虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by desheng101 at 2013-07-11 09:05:35
感谢您的回答,我们是大提的,所以超螺旋还很很多,就是出现比超螺旋还小的一条2500bp的带,所以我们回收,准备做一个转化。...

是否确认菌液()没问题?小提看看是否有多一条带?
以前出现过菌里有多个不明质粒的情况。
伟大航线....
5楼2013-07-11 09:17:57
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-07-11 12:20:14
引用回帖:
4楼: Originally posted by desheng101 at 2013-07-11 09:05:35
感谢您的回答,我们是大提的,所以超螺旋还很很多,就是出现比超螺旋还小的一条2500bp的带,所以我们回收,准备做一个转化。...

我觉得有其它带可能是菌有污染。把菌划线后挑单克隆验证正确后再大提。如果-80冰箱里有备份,可以试试重新活化再提提看。
6楼2013-07-11 11:07:16
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