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desheng101

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[求助] 大提质粒胶回收的问题

大提质粒，上样1ul，浓度我感觉还很高，一直出现小于超螺旋一条2500bp左右的条带，一直百思不得其解，后来上论坛根据自己的实验结果，觉得2500bp是裂解过程中出现的不正常质粒。但是还是想把超螺旋切下来做一个转化，于是第二个问题出现了，切下来的超螺旋胶回收再次电泳，发现出现了3条带。想问问各位下面2个问题
1，2500bp的条带出现的原因是什么
2，超螺旋胶回收3条带出现的原因是什么？是不是质粒的3种形态？

[ Last edited by desheng101 on 2013-7-10 at 17:39 ]

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1楼 2013-07-10 17:37:13

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cicelyzh

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【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
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kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-07-11 12:19:57

1. 你的目标质粒是多大的？
2. 关于超螺旋带回收后出现三条带的原因我想应该是这样：超螺旋是质粒的折叠构象，在胶回收过程中造成部分折叠破坏，形成开环和线性构象。
不知道你提出来的质粒超螺旋的比例。一般质量好的超螺旋占很大比例，没有必要从胶上再回收超螺旋质粒。

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2楼2013-07-11 07:31:43

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longrna

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引用回帖:

2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-11 07:31:43
1. 你的目标质粒是多大的？
2. 关于超螺旋带回收后出现三条带的原因我想应该是这样：超螺旋是质粒的折叠构象，在胶回收过程中造成部分折叠破坏，形成开环和线性构象。
不知道你提出来的质粒超螺旋的比例。一般质量 ...

同意二楼

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伟大航线....

3楼2013-07-11 08:52:10

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desheng101

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感谢您的回答，我们是大提的，所以超螺旋还很很多，就是出现比超螺旋还小的一条2500bp的带，所以我们回收，准备做一个转化。

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4楼2013-07-11 09:05:35

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longrna

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4楼: Originally posted by desheng101 at 2013-07-11 09:05:35
感谢您的回答，我们是大提的，所以超螺旋还很很多，就是出现比超螺旋还小的一条2500bp的带，所以我们回收，准备做一个转化。...

是否确认菌液（）没问题？小提看看是否有多一条带？
以前出现过菌里有多个不明质粒的情况。

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5楼2013-07-11 09:17:57

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【答案】应助回帖

★
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-07-11 12:20:14

引用回帖:

我觉得有其它带可能是菌有污染。把菌划线后挑单克隆验证正确后再大提。如果-80冰箱里有备份，可以试试重新活化再提提看。

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6楼2013-07-11 11:07:16

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