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郝连芷水

木虫 (小有名气)

[求助] 胶回收求助

大家好,我做pcr产物胶回收,最后用核酸仪测浓度,发现A230很高,导致A260/A230只有0.06,这肯定是碳水化合物污染了,是不是琼脂糖进去了?而且核酸浓度只有20ng/µl,大家出现过这样的问题吗?咋改善呢?
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longrna

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
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wanhscn(金币+5, MolEPI+1): Good!热心!专业!决定授予专家指数一枚! 2011-12-27 16:13:37
郝连芷水(金币+2): ★★★★★最佳答案 2011-12-27 19:34:22
一般来说260/230比值不影响很多实验。
你的胶回收产物准备用来做什么?
所以公司的胶回收试剂盒都存在260/230偏低的情况,目前还没有很好的解决办法。不过很多实验也验证过此比值低不影响后续实验。
造成此比值偏低的原因有两个:
1.胶回收过程中所使用的溶胶液为高盐溶液,虽然有后面的乙醇洗涤液洗,但没办法很好去除这个盐。
2.一般来说胶回收的产物量小,A260本来不高,所以得到的比值也不可尽信。很多仪器在A260小的时候已经超出了仪器的可信范围。
伟大航线....
4楼2011-12-27 15:13:20
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普通回帖

panda73

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
为什么不是A260/A280? 没听说过测A230的
2楼2011-12-26 20:57:16
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郝连芷水

木虫 (小有名气)

引用回帖:
: Originally posted by panda73 at 2011-12-26 20:57:16:
为什么不是A260/A280? 没听说过测A230的

核酸仪两个都测试的,A260/A280和A260/A230,前者是看蛋白污染,后者是看盐、碳水化合物等的污染,现在我胶回收的产率很低,所以我很纠结,不知道哪里出了问题。
3楼2011-12-27 14:44:27
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heroyl

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wanhscn(金币+2): 鼓励交流! 2011-12-27 16:33:45
这个应该不影响的吧,我们测浓度的时候基本不管230/260,只看浓度和260/280,20ng如果你做TA克隆之类的应该没问题的,放心做。
实验虐我千百遍,我待实验如初恋
5楼2011-12-27 16:32:29
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hjh155

木虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by heroyl at 2011-12-27 16:32:29:
这个应该不影响的吧,我们测浓度的时候基本不管230/260,只看浓度和260/280,20ng如果你做TA克隆之类的应该没问题的,放心做。

我想问一下,20ng能否进行测序?
6楼2012-03-08 09:29:13
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heroyl

木虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by hjh155 at 2012-03-08 09:29:13:
我想问一下,20ng能否进行测序?

20ng寄DNA的话估计不够,先坐TA克隆后寄菌液吧!
实验虐我千百遍,我待实验如初恋
7楼2012-03-09 09:03:47
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