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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 质粒提不出原因
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574759350

铁虫 (小有名气)

[求助] 质粒提不出原因 已有3人参与

将-80℃保存的pMD18-T载体于含AMP的LB划线活化，之后于含AMP的LB液体培养，送样测序后，测序公司说提取不出质粒，这是什么原因？

[ Last edited by silicare on 2014-2-18 at 12:17 ]
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1楼 2014-02-17 17:01:48
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zhaozhibozhi

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
574759350: 金币+1 2014-02-18 12:12:13
可能样品质粒丢失，最好先检测一下。
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做一个阳光、开朗的小和尚
2楼2014-02-17 17:08:56
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huangrui1988

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-02-18 11:52:10
574759350: 金币+2, ★有帮助 2014-02-18 12:12:35
你自己提取质粒送过去就好，公司经常会这么说的，因为他们的培养条件不好，通氧量以及总体积都不高的，anyway忽略他们就好
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3楼2014-02-17 18:06:36
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-02-18 11:52:19
我们实验室是将保存的菌种直接接种于液体培养液中活化后送去测序。另外，你自己可以先抽一个质粒，再进行PCR验证以确保万无一失后再送测序
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植根于内心的修养；无需提醒的自觉；以约束为前提的自由；为别人着想的善良
4楼2014-02-17 18:28:54
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574759350

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhaozhibozhi at 2014-02-17 17:08:56
可能样品质粒丢失，最好先检测一下。

但是不都有AMP筛选的么？
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5楼2014-02-18 12:12:26
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zhaozhibozhi

金虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 574759350 at 2014-02-18 12:12:26
但是不都有AMP筛选的么？...

抗性筛选经常不靠谱，最起码加个pcr检测。我都是自己提取质粒，PCR+酶切验证后，送正确质粒测序。
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做一个阳光、开朗的小和尚
6楼2014-02-18 13:55:28
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XOooZzz

银虫 (小有名气)
小公司的话一般是公司的问题，随便找个藉口敷衍你。
大公司的话就可能真的是送到菌有问题了，自己替个质粒送测吧。
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7楼2014-02-18 15:06:42
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