应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 这个提质粒DNA的原理是什么？
61/1返回列表
查看: 1315  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

小彪彪

新虫 (初入文坛)

[求助] 这个提质粒DNA的原理是什么？

请问一下这个方法提质粒DNA的原理是什么？最好详细点，说说试剂和温浴的作用。
这方法是提取大肠杆菌ColV质粒的，提取后用于PCR。

这样能提取出质粒么？我看书本上的方法都很麻烦的，而且这方法好像并没有弃掉任何试剂。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-03-06 16:40:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

peakg7

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
只看到，蛋白酶k可能是裂解细菌的。这些东西后面都灭活了，不影响你后面的实验，应该没关系
赞一下 回复此楼
2楼2013-03-06 19:28:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zltj2008

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这应该不是正规专门提质粒的方法，这种方法就是把菌体裂解开，把包括基因组DNA和质粒DNA都释放出来，电泳时应该都可以看到，然后可以做PCR检测或酶切。我印象中，这种方法应该算是构载体时的快速验证用的，比你常规提质粒后酶切或PCR什么的能省点时间。
赞一下 回复此楼
3楼2013-03-07 09:00:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小彪彪: 金币+2, ★有帮助, 谢谢 2013-03-12 15:06:04
原理跟常规试剂盒是一样的，都是先裂解菌，再使蛋白和DNA分离。
只是，这里挑取的事单菌落，最后用几十微升的水稀释，蛋白浓度已经被稀释的非常低了，因此无需弃掉什么。
赞一下 回复此楼
4楼2013-03-07 09:27:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

niil

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小彪彪: 金币+2, ★有帮助, 最好详细点哦 2013-03-12 15:05:21
这个方法并不是针对质粒提取的。方法的目的是把细菌细胞裂解，释放出细胞内部的DNA，包括质粒DNA。这样裂解得到的混合液最后可以取1-5微升作为模板进行PCR。
这跟菌落PCR的想法差不多，只不过多了这么一步裂解细菌细胞的步骤。
不过，这个方法使用蛋白酶k貌似不太合适，用溶菌酶可能会更好点，破坏细菌细胞的细胞壁估计会更重要点。
赞一下 回复此楼
Stop fighting,let it flow.
5楼2013-03-07 09:50:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小彪彪: 金币+1, ★有帮助, 最好详细点哦 2013-03-12 15:05:40
这个方法貌似只是把细菌裂解。蛋白酶K是核酸酶抑制剂。不过体系里面一般裂解菌的SDS/溶菌酶/碱什么的都没有，光靠加热80°C十分钟，感觉裂解效果不会很好吧。
赞一下 回复此楼
6楼2013-03-07 10:40:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 小彪彪 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料调剂 +4 爱擦汗的可乐冰 2026-02-28 4/200 2026-03-01 00:38 by 猫猫球alter
[考研] 307求调剂 +4 73372112 2026-02-28 6/300 2026-03-01 00:04 by ll247
[考研] 304求调剂 +3 52hz~~ 2026-02-28 5/250 2026-03-01 00:00 by 52hz~~
[考研] 317一志愿华南理工电气工程求调剂 +5 Soliloquy_Q 2026-02-28 8/400 2026-02-28 23:36 by xyx2012xyx
[考研] 272求调剂 +3 材紫有化 2026-02-28 3/150 2026-02-28 22:52 by ms629
[考研] 292求调剂 +3 yhk_819 2026-02-28 3/150 2026-02-28 21:57 by gaoxiaoniuma
[考研] 295求调剂 +5 19171856320 2026-02-28 5/250 2026-02-28 21:39 by gaoxiaoniuma
[考博] 26申博 +4 想申博！ 2026-02-26 4/200 2026-02-28 21:37 by limorning
[考研] 311求调剂 +8 南迦720 2026-02-28 8/400 2026-02-28 21:30 by gaoxiaoniuma
[考研] 284求调剂 +4 天下熯 2026-02-28 4/200 2026-02-28 21:13 by gaoxiaoniuma
[考研] 高分子化学与物理调剂 +4 好好好1233 2026-02-28 7/350 2026-02-28 20:42 by 好好好1233
[考研] 085600材料工程一志愿中科大总分312求调剂 +8 吃宵夜1 2026-02-28 10/500 2026-02-28 20:27 by L135790
[考研] 298求调剂 +8 人间唯你是清欢 2026-02-28 11/550 2026-02-28 20:26 by L135790
[考研] 276求调剂 +3 路lyh123 2026-02-28 4/200 2026-02-28 19:45 by 路lyh123
[考博] 博士自荐 +3 kkluvs 2026-02-28 3/150 2026-02-28 16:59 by StarAura
[考研] 0856调剂 +3 刘梦微 2026-02-28 3/150 2026-02-28 13:22 by houyaoxu
[考研] 寻找调剂 +3 LYidhsjabdj 2026-02-28 3/150 2026-02-28 12:59 by miniwendy
[硕博家园] 博士自荐 +6 科研狗111 2026-02-26 9/450 2026-02-28 12:32 by seaskyy
[考研] 298求调剂 +4 axyz3 2026-02-28 4/200 2026-02-28 11:21 by wang_dand
[基金申请] 面上可以超过30页吧？ +12 阿拉贡aragon 2026-02-22 13/650 2026-02-26 22:09 by Hahaxia
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭