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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 这个提质粒DNA的原理是什么？
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小彪彪

新虫 (初入文坛)

[求助] 这个提质粒DNA的原理是什么？

请问一下这个方法提质粒DNA的原理是什么？最好详细点，说说试剂和温浴的作用。
这方法是提取大肠杆菌ColV质粒的，提取后用于PCR。

这样能提取出质粒么？我看书本上的方法都很麻烦的，而且这方法好像并没有弃掉任何试剂。
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1楼 2013-03-06 16:40:43
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peakg7

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
只看到，蛋白酶k可能是裂解细菌的。这些东西后面都灭活了，不影响你后面的实验，应该没关系
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2楼2013-03-06 19:28:05
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zltj2008

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这应该不是正规专门提质粒的方法，这种方法就是把菌体裂解开，把包括基因组DNA和质粒DNA都释放出来，电泳时应该都可以看到，然后可以做PCR检测或酶切。我印象中，这种方法应该算是构载体时的快速验证用的，比你常规提质粒后酶切或PCR什么的能省点时间。
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3楼2013-03-07 09:00:12
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
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小彪彪: 金币+2, ★有帮助, 谢谢 2013-03-12 15:06:04
原理跟常规试剂盒是一样的，都是先裂解菌，再使蛋白和DNA分离。
只是，这里挑取的事单菌落，最后用几十微升的水稀释，蛋白浓度已经被稀释的非常低了，因此无需弃掉什么。
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4楼2013-03-07 09:27:36
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niil

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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小彪彪: 金币+2, ★有帮助, 最好详细点哦 2013-03-12 15:05:21
这个方法并不是针对质粒提取的。方法的目的是把细菌细胞裂解，释放出细胞内部的DNA，包括质粒DNA。这样裂解得到的混合液最后可以取1-5微升作为模板进行PCR。
这跟菌落PCR的想法差不多，只不过多了这么一步裂解细菌细胞的步骤。
不过，这个方法使用蛋白酶k貌似不太合适，用溶菌酶可能会更好点，破坏细菌细胞的细胞壁估计会更重要点。
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Stop fighting,let it flow.
5楼2013-03-07 09:50:38
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
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小彪彪: 金币+1, ★有帮助, 最好详细点哦 2013-03-12 15:05:40
这个方法貌似只是把细菌裂解。蛋白酶K是核酸酶抑制剂。不过体系里面一般裂解菌的SDS/溶菌酶/碱什么的都没有，光靠加热80°C十分钟，感觉裂解效果不会很好吧。
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6楼2013-03-07 10:40:27
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