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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » pcr程序问题
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webrother

银虫 (小有名气)

[求助] pcr程序问题 已有5人参与

68摄氏度  30～60sec/Kb
68摄氏度  7min(彻底延伸）  这两步有什么联系？而且我的片段是8K。
pcr程序问题
Camera_20140221_110901.jpg
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发扬钉子精神
1楼 2014-02-21 11:17:24
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webrother

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 西门吹雪170 at 2014-02-21 12:36:01
68℃延伸吗？还是请楼主把整个PCR的程序列出来吧

我的目的片段是8k,程序如下：
94    1min
94     10s
68     8min
68    7min
4      -----
2到3循环   35个
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发扬钉子精神
6楼2014-02-21 14:30:37
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)
68℃延伸吗？还是请楼主把整个PCR的程序列出来吧
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植根于内心的修养；无需提醒的自觉；以约束为前提的自由；为别人着想的善良
2楼2014-02-21 12:36:01
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
网速有点问题，现在看见了图片。。。前面的是每个循环里面的延伸时间，后者相当于最后的延伸，保证彻底的扩增吧
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植根于内心的修养；无需提醒的自觉；以约束为前提的自由；为别人着想的善良
3楼2014-02-21 12:39:47
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朱多龙

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
3楼: Originally posted by 西门吹雪170 at 2014-02-21 12:39:47
网速有点问题，现在看见了图片。。。前面的是每个循环里面的延伸时间，后者相当于最后的延伸，保证彻底的扩增吧

两步法快速PCR反应程序啊。前面的68度（变性退火合一）是对你目的片段的初步延伸，后面的68度再次延伸7min中是为了保证反应体系中未得到延伸完全的片段充分延伸啊。
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4楼2014-02-21 12:54:52
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