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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » pcr程序问题
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webrother

银虫 (小有名气)

[求助] pcr程序问题 已有5人参与

68摄氏度  30～60sec/Kb
68摄氏度  7min(彻底延伸）  这两步有什么联系？而且我的片段是8K。
pcr程序问题
Camera_20140221_110901.jpg
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发扬钉子精神
1楼 2014-02-21 11:17:24
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

朱多龙

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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3楼: Originally posted by 西门吹雪170 at 2014-02-21 12:39:47
网速有点问题，现在看见了图片。。。前面的是每个循环里面的延伸时间，后者相当于最后的延伸，保证彻底的扩增吧

两步法快速PCR反应程序啊。前面的68度（变性退火合一）是对你目的片段的初步延伸，后面的68度再次延伸7min中是为了保证反应体系中未得到延伸完全的片段充分延伸啊。
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4楼2014-02-21 12:54:52
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普通回帖

西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)
68℃延伸吗？还是请楼主把整个PCR的程序列出来吧
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植根于内心的修养；无需提醒的自觉；以约束为前提的自由；为别人着想的善良
2楼2014-02-21 12:36:01
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

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网速有点问题，现在看见了图片。。。前面的是每个循环里面的延伸时间，后者相当于最后的延伸，保证彻底的扩增吧
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3楼2014-02-21 12:39:47
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 朱多龙 at 2014-02-21 12:54:52
两步法快速PCR反应程序啊。前面的68度（变性退火合一）是对你目的片段的初步延伸，后面的68度再次延伸7min中是为了保证反应体系中未得到延伸完全的片段充分延伸啊。...

很专业的回答，谢谢，学习了
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5楼2014-02-21 14:14:33
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webrother

银虫 (小有名气)
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2楼: Originally posted by 西门吹雪170 at 2014-02-21 12:36:01
68℃延伸吗？还是请楼主把整个PCR的程序列出来吧

我的目的片段是8k,程序如下：
94    1min
94     10s
68     8min
68    7min
4      -----
2到3循环   35个
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发扬钉子精神
6楼2014-02-21 14:30:37
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webrother

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 朱多龙 at 2014-02-21 12:54:52
两步法快速PCR反应程序啊。前面的68度（变性退火合一）是对你目的片段的初步延伸，后面的68度再次延伸7min中是为了保证反应体系中未得到延伸完全的片段充分延伸啊。...

二部法与三部分有什么区别？
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发扬钉子精神
7楼2014-02-21 14:33:51
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)
引用回帖:
7楼: Originally posted by webrother at 2014-02-21 14:33:51
二部法与三部分有什么区别？...

二部是把退火与延伸时间结合到一起，三部的话是把这两个过程分开
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植根于内心的修养；无需提醒的自觉；以约束为前提的自由；为别人着想的善良
8楼2014-02-21 18:12:16
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lvbobo823

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

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你这是两步法。你这68度相当于咱平时用的72度。
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hehe
9楼2014-02-21 20:20:53
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forrestgump

新虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

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一个是内循环，一个是循环外啊，外循环可以为72度。你是个newcomer吧！
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10楼2014-02-21 22:19:45
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