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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 有个PCR程序不大懂 求师兄师姐帮我看看 呜呜 金币不多，但诚心求教！
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406587521

新虫 (初入文坛)

[求助] 有个PCR程序不大懂 求师兄师姐帮我看看 呜呜 金币不多，但诚心求教！

要做分子标记的试验，用RGA标记DNA，文献上的PCR程序不太明白，不知道怎么设置这个程序，求师兄师姐 帮忙解答一下！谢谢！PCR程序原文如下：“AmpliTcation was carried out ina Perkin-Elmer model 480 thermal cycler programmed for 5 min at 94C for initial denaturation and 45 cycles consisting of 1 min at 94C, 1 min at 45C, and 2 min at 72C, followed by a final 7-min extension at 72C. A 2.5-min ramp time was used between the 94C denaturation and the 45C annealing steps; the fastest possible ramp for all other temperature transitions used. ”主要是“A 2.5-min ramp time was used between the 94°C denaturation and the 45°C annealing steps. The fastest possible ramp was employed for all other temperature transitions.”这句看不懂，不知道怎么设置。
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1楼 2013-11-27 22:20:01
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Davidzjy

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+3, 鼓励交流！ 2013-11-29 14:42:05
这句话是说
在94度的解旋和45度的退火之间的降温过程持续2.5分钟（ramp——斜坡）
其他温度变化过程尽可能快（机器最小值）
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2楼2013-11-28 02:29:06
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lf6220

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
同意楼上的说法，应该是机器默认设置

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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3楼2013-11-28 07:05:00
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406587521

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Davidzjy at 2013-11-28 02:29:06
这句话是说
在94度的解旋和45度的退火之间的降温过程持续2.5分钟（ramp——斜坡）
其他温度变化过程尽可能快（机器最小值）

恩恩 但是具体到PCR仪上面需要怎么设置参数呢？
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4楼2013-11-28 08:35:57
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406587521

新虫 (初入文坛)
感谢大家，这句话明白了 可是 不懂怎么设置参数
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5楼2013-11-28 08:36:58
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Davidzjy

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by 406587521 at 2013-11-28 08:35:57
恩恩 但是具体到PCR仪上面需要怎么设置参数呢？...

那就要看你用的是什么机器了
说明书是初学者最好的工具
实在不行就问厂家的技术支持
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6楼2013-11-28 09:16:15
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看海的snoopy

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-29 14:42:18
406587521: 金币+30, ★★★很有帮助, 设好了 大概是94c-45c=49c 49c/2.5min=0.3c/s 2013-11-29 16:23:53
就是一个斜率问题，简单地说是调节升降温的速率，使得升降温的速度变慢，以便符合上述文献中的要求，具体的设置就需要你去查看那台一起的说明书了，网上有下载的。大概斜率的百分比和时间的长短都会有一个详细的说明。希望能帮到你。
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7楼2013-11-29 13:52:49
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