应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 简并引物PCR扩增问题
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
91/1返回列表
查看: 2001  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

tmoonday

金虫 (小有名气)

[求助] 简并引物PCR扩增问题 已有5人参与

各位虫友好，敝人这段时间一直苦于基因克隆问题上，希望高人能够不吝赐教。请问各位大仙一般用简并引物扩增基因时的反应程序是什么啊，50ul体系各个成分的量一般怎么组合啊？谢谢啦
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
等一份缘分
1楼 2014-02-18 10:46:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
tmoonday: 金币+2, ★有帮助, 试试啊 2014-02-18 13:24:56
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-02-18 18:00:28
10X LA Buffer:5uL
dNTP:4uL
上游:2uL
下游:2uL
模板：1uL
LA Taq：0.5uL
加水至50uL

1、94℃ 2min
2、94℃ 30sec
3、54℃ 30sec    此温度根据自己的引物进行调节
4、72℃ 2min     延伸时间根据扩增的片段大小进行调节   
5、72℃ 10min
2-4共35 cycles
赞一下(2人) 回复此楼
植根于内心的修养；无需提醒的自觉；以约束为前提的自由；为别人着想的善良
2楼2014-02-18 13:13:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

YL1255968814
3楼2014-02-18 14:00:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hellolin

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流经验！ 2014-02-18 17:59:56
体系和普通PCR差不多，关键是退火温度，我们一般用40-45℃
赞一下(2人) 回复此楼
scienceguy
4楼2014-02-18 14:03:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

forrestgump

新虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-02-18 18:00:02
简并引物的退火温度最好用TD-PCR，再搞巢shiPCR
赞一下 回复此楼
5楼2014-02-18 14:16:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-02-18 18:00:15
你想用哪个酶进行扩增？？如果选定了那个酶，那么你买酶的时候就会带着说明书的，按上面的做。
扩增的时候我一般加甜菜碱（50ul的体系里面加5ul5M的甜菜碱），效果比较好。不加也可以。
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2014-02-18 16:59:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dameng198400

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by hellolin at 2014-02-18 14:03:17
体系和普通PCR差不多，关键是退火温度，我们一般用40-45℃

温度那么低的话，会不会二聚体太多？
赞一下 回复此楼
7楼2014-08-29 09:59:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

爱上鱼……

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我按平常的pcr条件就做出来了，结果没啥区别哦。
赞一下 回复此楼
懒病又犯了……
8楼2014-08-29 11:07:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hellolin

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by dameng198400 at 2014-08-29 09:59:15
温度那么低的话，会不会二聚体太多？...

不会的，扩出来没问题
赞一下 回复此楼
scienceguy
9楼2014-08-30 21:24:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 tmoonday 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿211，化学学硕，310分，本科重点双非，求调剂 +15 努力奋斗112 2026-04-06 17/850 2026-04-08 22:27 by 凯凯要变帅
[考研] 327求调剂 +12 Xxjc1107. 2026-04-06 12/600 2026-04-08 16:46 by luoyongfeng
[考研] 22408 调剂材料 +7 我叫ez 2026-04-06 8/400 2026-04-07 17:12 by 蓝云思雨
[考研] 0854求调剂 +9 亨氏番茄沙司 2026-04-06 10/500 2026-04-07 14:37 by shdgaomin
[考研] 一志愿太原理工大学计算机技术专硕348，求调剂指导 +3 nexious 2026-04-05 3/150 2026-04-07 08:19 by jp9609
[考研] 297分083200求助 +9 aekx 2026-04-05 9/450 2026-04-06 20:57 by flysky1234
[考研] 生物学调剂 可调剂到生物与医药 +3 李政莹 2026-04-06 3/150 2026-04-06 19:02 by macy2011
[考研] 285求调剂 +5 mapmath 2026-04-06 6/300 2026-04-06 17:18 by 蓝云思雨
[考研] （调剂）一志愿报考哈尔滨工业大学0857资源与环境专业378分考生 +7 狠狠加油 2026-04-05 8/400 2026-04-06 16:52 by momo皓
[考研] 专硕304找调剂，一线城市最好 +3 李lsl李 2026-04-05 3/150 2026-04-06 12:16 by ffffjjjj
[考研] 085600，320分求调剂 +16 大馋小子 2026-04-04 17/850 2026-04-06 07:58 by MOF_Catal
[考研] 328分调剂 +6 门men 2026-04-04 6/300 2026-04-05 13:40 by imissbao
[考研] 0854求调剂 +4 assdll 2026-04-04 4/200 2026-04-05 09:44 by zhq0425
[考研] 调剂 +9 19945159693 2026-04-03 10/500 2026-04-04 20:16 by dongzh2009
[考研] 一志愿沪985，326分求调剂 +3 刘墨墨 2026-04-03 3/150 2026-04-04 11:16 by 悲伤的芋头
[考研] 调剂 +5 asdasdassda 2026-04-03 6/300 2026-04-03 20:27 by 岸上的一条鱼
[考研] 372分材料与化工（085600）一志愿湖南大学求调剂 +3 蓝笺片 2026-04-03 4/200 2026-04-03 17:58 by Jimmyandyou
[考研] 338求调剂 +4 zzz，，r 2026-04-03 4/200 2026-04-03 16:39 by lijunpoly
[考研] 专硕085601求调剂 +7 suyifei 2026-04-03 8/400 2026-04-03 14:00 by 欣喜777
[考研] 266求调剂 +4 学员97LZgn 2026-04-02 4/200 2026-04-02 09:52 by yulian1987
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭