应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 简并引物PCR扩增问题
91/1返回列表
查看: 2066  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

tmoonday

金虫 (小有名气)

[求助] 简并引物PCR扩增问题 已有5人参与

各位虫友好，敝人这段时间一直苦于基因克隆问题上，希望高人能够不吝赐教。请问各位大仙一般用简并引物扩增基因时的反应程序是什么啊，50ul体系各个成分的量一般怎么组合啊？谢谢啦
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
等一份缘分
1楼 2014-02-18 10:46:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
tmoonday: 金币+2, ★有帮助, 试试啊 2014-02-18 13:24:56
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-02-18 18:00:28
10X LA Buffer:5uL
dNTP:4uL
上游:2uL
下游:2uL
模板：1uL
LA Taq：0.5uL
加水至50uL

1、94℃ 2min
2、94℃ 30sec
3、54℃ 30sec    此温度根据自己的引物进行调节
4、72℃ 2min     延伸时间根据扩增的片段大小进行调节   
5、72℃ 10min
2-4共35 cycles
赞一下(2人) 回复此楼
植根于内心的修养；无需提醒的自觉；以约束为前提的自由；为别人着想的善良
2楼2014-02-18 13:13:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

YL1255968814
3楼2014-02-18 14:00:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hellolin

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流经验！ 2014-02-18 17:59:56
体系和普通PCR差不多，关键是退火温度，我们一般用40-45℃
赞一下(2人) 回复此楼
scienceguy
4楼2014-02-18 14:03:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

forrestgump

新虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-02-18 18:00:02
简并引物的退火温度最好用TD-PCR，再搞巢shiPCR
赞一下 回复此楼
5楼2014-02-18 14:16:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-02-18 18:00:15
你想用哪个酶进行扩增？？如果选定了那个酶，那么你买酶的时候就会带着说明书的，按上面的做。
扩增的时候我一般加甜菜碱（50ul的体系里面加5ul5M的甜菜碱），效果比较好。不加也可以。
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2014-02-18 16:59:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dameng198400

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by hellolin at 2014-02-18 14:03:17
体系和普通PCR差不多，关键是退火温度，我们一般用40-45℃

温度那么低的话，会不会二聚体太多？
赞一下 回复此楼
7楼2014-08-29 09:59:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

爱上鱼……

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我按平常的pcr条件就做出来了，结果没啥区别哦。
赞一下 回复此楼
懒病又犯了……
8楼2014-08-29 11:07:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hellolin

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by dameng198400 at 2014-08-29 09:59:15
温度那么低的话，会不会二聚体太多？...

不会的，扩出来没问题
赞一下 回复此楼
scienceguy
9楼2014-08-30 21:24:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 tmoonday 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿A区211，22408 321求调剂 +7 随心所欲☆ 2026-04-15 8/400 2026-04-21 08:22 by Equinoxhua
[考研] 一志愿中科大材料与化工，353分还有调剂学校吗 +11 否极泰来2026 2026-04-15 13/650 2026-04-20 22:31 by Equinoxhua
[考研] 085600材料与化工调剂 5+3 孜孜不倦2002 2026-04-19 6/300 2026-04-20 21:25 by babero
[论文投稿] 期刊推荐 +3 材料研究生 2026-04-15 5/250 2026-04-20 16:02 by 豆豆7758
[论文投稿] 有没有接收比较快的sci期刊呀，最好在一个月之内的，研三孩子求毕业 20+4 之护着 2026-04-16 7/350 2026-04-20 15:45 by 豆豆7758
[教师之家] 又一批高校组建人工智能学院 师资行吗 不是骗人吗 +4 yexuqing 2026-04-19 4/200 2026-04-20 14:47 by brantleo
[考研] 337求调剂 +3 jyz04 2026-04-18 3/150 2026-04-20 12:24 by 研可安
[考博] 申博/考博 +4 啃面包的小书虫 2026-04-17 5/250 2026-04-20 10:47 by YuY66
[考研] 求计算机方向调剂 +3 Toffee2 2026-04-16 6/300 2026-04-19 22:37 by ll叶
[考研] 291求调剂 +11 关忆北. 2026-04-14 11/550 2026-04-19 17:16 by 中豫男
[考研] 304求调剂 +8 castLight 2026-04-16 8/400 2026-04-19 17:14 by 中豫男
[考研] 求调剂 +10 小聂爱学习 2026-04-16 12/600 2026-04-19 16:51 by 中豫男
[考研] 291求调剂 +12 关忆北. 2026-04-14 13/650 2026-04-19 16:50 by 中豫男
[考研] 求调剂 +6 苦命人。。。 2026-04-18 7/350 2026-04-19 16:27 by 中豫男
[考研] 307中医考研调剂 +9 于以采蘩 2026-04-14 9/450 2026-04-19 08:41 by 烟雨流涯
[考研] 0854求调剂 +23 门路摸摸 2026-04-15 27/1350 2026-04-19 01:59 by 烟雨流涯
[考研] 300求调剂 +12 橙a777 2026-04-15 12/600 2026-04-18 23:51 by 路病情
[考研] 一志愿华中农业071010，320求调剂 +17 困困困困坤坤 2026-04-14 19/950 2026-04-17 20:08 by 关一盏灯cd
[考研] 322求调剂 +6 tekuzu 2026-04-17 6/300 2026-04-17 13:48 by Espannnnnol
[考研] 一志愿沪9，生物学326求调剂 +9 刘墨墨 2026-04-15 9/450 2026-04-16 17:14 by 崔崔崔cccc
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭